细胞实验技术新1.doc

一、名词解释 紫外-可见分光光度法及其用途:是利用物质在紫外、可见光区的分子吸收光谱，对物质进行定性分析、定量分析及结构分析的方法。 电泳及其主要类型：蛋白质在高于或低于其pI的溶液中为带电的颗粒，在电场中能向正极或负极移动。这种通过蛋白质在电场中泳动而达到分离各种蛋白质的技术, 称为电泳。 荧光及其用途: 细胞中的某些物质(如叶绿素)经紫外线照射后能发出可见光线，称为荧光。 萨瑟恩杂交Southern blotting：是体外分析特异DNA序列的方法，操作时先用限制性内切酶将核DNA或线粒体DNA切成DNA片段，经凝胶电泳分离后，转移到醋酸纤维薄膜上，再用探针杂交，通过放射自显影，即可辨认出与探针互补的特殊核苷序列 诺森杂交Northern hybridization等几种杂交技术及其用途：northern 杂交与Southern杂交主要的不同之处在于检验物是RNA，而不是DNA。首先是提取某种生物或组织的总RNA或mRNA，然后用含有变性剂(硫氰酸胍、乙二醛)的琼脂糖凝胶电泳分离RNA，变性剂的作用是防止RNA自我退火形成局部双链，影响泳动率，干扰实验结果。电泳分离后再将凝胶上的RNA带吸印到尼龙膜上，在液相中和标记的核酸探针进行杂交。 细胞培养：把来自机体的组织经分散成为单个细胞，放在类似于体内的体外环境中生存，使其不断生长、繁殖或传代，借以观察细胞的生长、繁殖、衰老等生命现象。 沉降速度法等离心技术：沉降速度法:根据被分离物质的沉降系数不同来分离物质。梯度中最大的密度要小于样品中最小颗粒密度。包括差速离心法和区带离心法(速度-区带离心法)。 盐析及分段盐析等蛋白质分离技术：是将硫酸铵、硫酸钠或氯化钠等加入蛋白质溶液，使蛋白质表面电荷被中和以及水化膜被破坏，导致蛋白质沉淀。 由于不同的蛋白质其溶解度与等电点不同，沉淀时所需的pH值与离子强度也不相同，改变盐的浓度与溶液的pH值，可将混合液中的蛋白质分批盐析分开，这种分离蛋白质的方法称为分段盐析法(fractional saltingout)。 摩尔吸光系数：物质对某波长的光的吸收能力的量度。指一定波长时，溶液的浓度为1 mol/L，光程为 1cm时的吸光度值，用ε或EM表示。ε越大，表明该溶液吸收光的能力越强，相应的分光度法测定的灵敏度就越高。 预杂交及其作用：预杂交(Prehybridizaiton)是减低背景染色的一种有效手段。预杂交液和杂交液的区别在于前者不含探针和硫酸葡聚糖(Dextran sulphate)。将组织切片浸入预杂交液中可达到封闭非特异性杂交点的目的，从而减低背景染色。 细胞系(cell line):原代培养细胞成功传代即为细胞系。 细胞株(cell strain):从培养细胞中筛选出的具有特定性质或标志的细胞群。 流式细胞术（Flow Cytometry, FCM）：利用流式细胞仪对处于快速流动的细胞或生物颗粒进行多参数、快速(每秒可达1000-10000个)的定量分析和分选(纯度可达99%以上)的技术。二、问答题 1.什么是柯勒照明？简述柯勒照明的方法与步骤。 柯勒照明：光源经集光器将视场光阑像呈到标本平面上，灯丝成像于孔径光阑。 柯勒照明五步走： 1将目镜屈光度调节环放置零位 。2用10X物镜将标本调焦清晰 。3把灯丝成像于聚光镜孔径光阑的下表面上。4收小视场光阑。 5通过聚光镜调节旋钮将视场光阑调清晰，使用对中旋钮将视场光阑对中。 6放大视场光阑至外切于视野位置 7取下目镜，检查物镜的后焦面处光是否均匀。缩小孔径光阑，直到其出现在物镜后焦面上。调整孔径光阑，使它的直径为物镜后焦面直径的7／8。放回目镜，检查成像质量。 8为了得到合适的对比度及景深，需要调节孔径光阑。8在更换过物镜以后，需要调整视场光阑(控制照明区域)，以及孔径光阑 2. 试述一般光学显微镜的基本构造。 系统构成： ①照明系统 ②光学放大系统 ③机械装置 目镜(放大物象) 镜筒(连接目镜与物镜)转换器(调换物镜)粗准焦螺旋(升降镜筒)细准焦螺旋(升降镜筒)镜臂(连接)镜柱(支持)物镜(放大物象)载物台(放置玻片)通光孔(光线通过)压片夹(固定玻片)反光镜(反射光线) 3. 电子显微镜与光学显微镜主要的区别： ①照明源不同。电镜所用的照明源是电子枪发出的电子流，而光镜的照明源是可见光(日光或灯光)，由于电子流的波长远短于光波波长，故电镜的放大及分辨率显著地高于光镜。 ②透镜不同。电镜中起放大作用的物镜是电磁透镜(能在中央部位产生磁场的环形电磁线圈)，而光镜的物镜则是玻璃磨制而成的光学透镜。电镜中的电磁透镜共有三组，分别与光镜中聚光镜、物镜和目镜的功能相当。 ③成像原理不同。在电镜中，作用于被检样品的电子束经电磁透镜放大后打到荧光屏上成像或作用于感光胶片成像。而光镜中样品的物像