利用基因芯片技术研究脊索瘤发病相关基因-骨外科学专业论文.docxVIP

4 4 二U精隐隐且鹏 2ω4 蝇咽世事恤情义 缩略词表 英文缩写 撰文名称 中文名称 cRNA Complement徽y ribonucleic llCid 互补核糖核酸 cDNA Complementary 伽oxyribonucleic acid 互补脱氧核糖核酸 CT Cycle of tbreshold 掷f在循环数〈是指 每个反应管内的荧光傍号 到达设定 的阙键时所经历的循环数〉 D巴PC EP diethyl pyrocarbonate Eppendorf tube 焦磷酸二乙蹦 德商Eppendorf 公司1::产 的 广挠使用的离心智 ESτ Ex严部岱dSeq祖母且.ceT:锦， EST 基因表达序列标签 RT CR 反应 Reverse 位anscription polymer郁e 迦转录聚合酶链式 chain reaction 俨BS Fetal Bovine Serum 黯牛.lfil.清 FQ.PCR 反应 r幽1 - time t1uoresc唰 实时荧光}?!盘聚合蹲链 Quantitative PCR HGP human genome proj邸t 人类基因组计划 lVT invitro 刷刷iption 体外转录 然RNA mess号黯gerri如肌c{，刷刷d 信使核糖核酸 PBS phosp始到:e buffered 锦line 磷酸鼓缓J中1:现鼓水 rpm rotations per minute 每分钟转速 sec Seconds 秒 品阜凰点融 2∞4 鹏躏古斟辑悔2比 mln Minu怡$ 分 h Hour 小时 11 11 独创性声明 本人声明所盘变的学位论文是我个人在尊师指静下进行的研究 工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人 已组发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的 任例贡献均日在论文中作了明确的说明井表示谢意。本人承担本声明 的法律责任。 学位论文作者签名: 签字日期 1 年月日 学位论文使用据权书声明 本人知全了解第二靠医大学有关保留、使用学位论文的规定，有 权保留井岗黯家有关部门或机构增变论文的复印件和黯盘，兔许论文 被班阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部成部分 内容编入有关数据库进抒栓索，可以来照影印、缩印或扫描等室主制手 段保存、[:编学位论文。(保甜的学位论文在解密脂适用本授权书) 学位论文作者签名: 签字日期: 年月日 导师签名z 签字，日期 E 年月日 ，目幌能冉鹏 ，目幌能冉鹏2∞呻麟唰世瞩恤悻2民 PAGE PAGE 6 摘要 脊索瘤f盖起源于胚胎残余脊索组织的版发性磁性骨肿瘤，主要喜发生在中轴 费.近年来通过 LOH、MI 分析技术及癌基因、掷癌奉§泪在染色体的定位初步发现 脊索瘤的染色体交易主要在 lp36 及 7q33. 随着基因芯片微阵列分析、文库技术、 生物倍，怠技术、 DDPCR 、RFLP 等薪技术的发展与应恕，夜景费 1海园的扩增、掷瘾蔡 困的突变以及徽卫星不稳定性分析等方面，对脊索瘤的发生、进展机制有了初步 的揭示e 但日前的实验研究多采用肿瘤旁正常组织作为对照，与脊索瘤不具有组 织同源性，并且筛选通量较小，难以真实、金顶反映将索瘤发病相关黎国的情况。 本研究采用新鲜脊索瘤 3例作为实验组，新鲜胎儿椎间盘髓核组织 1例作为对 黯缀，分别统取总 RNA ，纯化后遂行反转录合成双链cDNA，纯化后进…步合成生物 索标记的cDNA. 并实现片段化。用试验级和对照组的生物索标记的 cDNA分别与芯 片杂交， 8ωnArray300号扫描与hnaGen串软伶分析结巢并进行部 A溅序.ep得到脊索 姻与胎儿髓核组织的整舜表达基因，设计差异表达黎囚的引物并进行兔疫荧光定 锺PCR验证，对得到的差异表达基因进行生物信息学分析并揭示脊索瘤发病的榕 关机制。 院的s 方法2  L 使用胎儿黯核组织〈在发育生物学上街源〉作为 IE常对照进行 脊索瘤维病机制的研究。 2、夜遂自级水平上研究脊索瘤发病根关基础在手进行筛选. 3、完成对脊荒草瘤发病机制的初步探索，为脊索瘤的旅因诊断、基 因治疗提供靶燕园。 4、为选一步放行脊索瘤发病栩关基囚的基因敲除与转染研究奠 定前期强础。 1、脊索瘤组织与胎儿髓极组织的收集，实验用十例脊索瘤组织标本均 为坊。3年12月至2005年8另期间第二工慈医大学长海医院骨科守主*切除桥 本.术中切除立即货入液氮罐中冻符备用。所有组织样本均经长海医院 病理科免疫病缀确给为脊索瘤。胎儿髓核级织为 2005年3月烹S月期间第 二等院大学长海 院妇产科引产胎儿髓核组织，哥|产后立即切取标本并 :II!=:鹏昆血事