蓝桉油对大鼠慢性气道炎症及粘蛋白高分泌的影响-药理学专业论文.docxVIP

浙江大学硕士学位论文 浙江大学硕士学位论文 苴投油对大鼠慢性气道炎症及粘蛋白高分泌的影响 蓝桉油对大鼠慢性气道炎症及粘蛋白高分泌的影响 浙江大学医学院 药理学 2001级硕士研究生 吕小琴 导师 唐法娣 摘要 前言：气道慢性炎症，如慢性支气管炎、支气管哮喘和囊性纤维化中，气道粘 液的高分泌是一个重要的病理特征，粘液潴留不但加重感染和气道阻塞，并且使 气体交换功能障碍，导致慢性阻塞性肺病的发生和死亡。粘蛋白是气道粘液的一 个重要组成部分，为一类具有典型的粘附性和弹性的糖蛋白，能捕获气道中的外 来物质，并通过粘膜一纤毛系统将之除去。粘蛋白主要表达为2种形式：膜相关性 粘蛋白和分泌性粘蛋白。气道中，MUCI、MUC4和MUCIl是存在于上皮细胞表面的 主要的膜相关蛋白，包括胞质区、跨膜区和胞外区三部分。其在气道中的作用尚 不清楚。肺内主要的分泌性粘蛋白包括MUC2(由含或不含分泌颗粒的细胞分泌)， MUC5ac(由气道表层上皮和粘膜下腺体的粘液细胞分泌)，MUCSb和MUC8(由粘膜 下腺体的粘液细胞分泌)，MUC?(由粘膜下腺体的浆液细胞分泌)。通过一些有效 的研究工具，如人气道上皮细胞培养、特异性的粘蛋白抗体和慢性气道炎症性疾 病模型等的使用，目前有一系列的证据表明．粘蛋白对杯状细胞化生、粘液高分 泌和气道粘液堵塞等病理进展有着非常重要的决定性的作用。 蓝桉油是蓝桉的纯天然植物提取物，含有n．蒎烯和1，8．桉油素。有关蓝桉油 及其两种成分的文献报导不是很多，且多是体外研究结果。虽然目前桉油及其复 塑垩查兰堡主兰垒堕苎 塑垩查兰堡主兰垒堕苎 苎堡垫翌查塾堡堡墨塑壅壁墨整墨鱼壅坌鳖塑墅堕 方制剂等已经广泛用于治疗上、下呼吸道疾病，如鼻窦炎、急慢性支气管炎和哮 喘等，但其抗炎机制和对粘液分泌尤其是粘蛋白的分泌有关的作用仍不明确。故 在本研究中，我们建立了SD大鼠慢性气道炎症模型，并观察了蓝桉油在气道炎症 和粘蛋白高分泌中的作用。 目的：建立大鼠小剂量脂多糖(LPS)气管滴入及长期二氧化硫(S02)吸入诱发 的慢性气道炎症模型，并以蓝桉油不同剂量为给药组，检测大鼠BALF中炎症细 胞和粘蛋白的变化，并通过IIE染色、AB．PAS染色和免疫组化染色分析进一步观 察蓝桉油在气道炎症和粘蛋白高分泌中的作用。 方法：采用SD大鼠为研究对象，建立小剂量脂多糖(LPS)气管滴入及长期二氧 化硫(S02)吸入诱发的慢性气道炎症模型，并以蓝桉油不同剂量为给药组。 ①大鼠行右侧肺叶支气管肺泡灌洗，灌洗液(BALF)收集后lh内即取其0．2ml， 用白细胞计数液倍比稀释后进行白细胞计数；其余BALF以1500 r／min离心10min， 上清液一70℃保存，测定粘蛋白含量；沉淀物涂片，自然干燥，用瑞氏．姬姆萨染色 后作白细胞分类计数。 ②取气管左主支气管作横切面，肺取左叶，均经10％甲醛固定，漂洗、脱水、透 明和石蜡包埋。切片常规化蜡、梯度酒精下行入水，分别行HE染色和AB．PAS染 色，按本室制定的分级标准进行分析。 ⑧石蜡切片，常规脱蜡至水，行免疫组化sP法羊抗大鼠MUC5ac多克隆抗体染色， 图像分析系统测定气管和细支气管上皮阳性染色的平均光密度(AOD)、粘蛋白面 积％(阳性染色面积与气管或细支气管上皮面积之比)。 ④计量资料数据以X±s表示，采用两组间均数t检验：等级资料采用U检验，P 0．05为差异有显著性。 结果： 1、蓝桉油对大鼠BALF中细胞计数和自细胞分类的影响 两组致炎组中，模型组BALF中白细胞总数及中性粒细胞明显高于正常对照 组，蓝桉油用药组。尤其是蓝桉油300mg／kg组可明显降低BALF中自细胞总数及 中性粒细胞数，表明蓝桉油高剂量给药对慢性气道炎症的细胞数增高有抑制作用。 在soz致炎组中，蓝桉油100mg／kg组BALF中的中性粒细胞百分比，和在LPS致炎 组中，蓝桉油30mg／kg组BALF中的中性粒细胞百分比也呈明显下降，这也说明蓝 #，2 塑垩查堂堡圭堂堡堕苎 塑垩查堂堡圭堂堡堕苎 蔓堡塑翌查墨堡丝墨望壅塞丝整曼皂壹坌兰箜墅堕 桉油给药确实呈现了抑制炎症细胞增多的趋势。 2、蓝桉油对慢性气道炎症大鼠病理组织学的影响 肺部病理组织切片检查可见模型组大鼠有不同程度、不同数量的气管、支气管、 细支气管慢性炎症及肺间质炎症，少数气管、支气管可见柱状上皮脱落。SO：致炎 中，蓝桉油用药组与模型组相比，其细支气管炎、细支气管炎累积数的发生及严 重程度明显降低；蓝桉油300 mg／kg组还可见其杯状细胞分布减少，阳性细支气管 数与模型组相比有明显下降。表明蓝桉油对大鼠SO：性细支气管炎的发生有预防作 用。LPS致炎中，蓝桉油