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四、其他培养用液 平衡盐溶液 消化液 pH调整液 平衡盐溶液（balanced salt solution，BSS） ??? 组成 平衡盐溶液主要是由无机盐、葡萄糖组成 作用 是维持细胞渗透压平衡，保持 pH 稳定及提供简单的营养 用途 主要用于取材时组织块的漂洗、细胞的漂洗、配制其他试剂 配制溶液应使用双蒸水或去离子水。如果配方中含有 Ca2+、Mg2+， 应当首先溶解这些成分。配好的平衡盐溶液可以过滤除菌或高温灭菌 四、其他培养用液 消化液 用途 取材进行原代培养时需要将组织块消化解离形成细胞悬液 传代培养时也需要将贴壁细胞从瓶壁上消化下来 ??? 胰酶溶液 胰酶的活性可以用消化酪蛋白的能力表示，常见 1 : 125 和 1 : 250 组织培养用的胰酶溶液一般配制成 0.1～0.25% 的浓度，配制时要 用不含 Ca2+、Mg2+ 及血清的平衡盐溶液 胰酶作用及溶解的最佳 pH 8～9，配制胰酶溶液应将液体调至 pH8 过滤除菌。 四、其他培养用液 消化液 EDTA溶液 EDTA 溶液也常用来解离细胞，它的作用机制是破坏细胞间的连接。 对于一些贴壁特别牢固的细胞，还可以用 EDTA和胰酶的混合液进行 消化 EDTA 溶液的使用浓度为 0.02%，配制时应加碱助溶，配制后可过滤 除菌，也可高温消毒灭菌。 胶原酶溶液 胶原酶在上皮类细胞原代培养时经常使用，胶原酶作用的对象是胶原 组织，因此不容易对细胞产生损伤。 胶原酶的使用浓度为 0.1～0.3mg/L或200000U/L，作用的最佳pH6.5 胶原酶不受 Ca2+、Mg2+ 及血清的抑制，配制时可用 PBS。 四、其他培养用液 pH调整液 NaHCO3 溶液 NaHCO3是培养基中必须添加的成分，一般情况下按说明书的要求准 确添加，以保证培养基在 5% CO2 的环境下 pH 达到设计标准。 如果是封闭式培养，即不与 5% CO2的环境发生交换达到平衡，所使 用的培养基就不能按照说明书所要求加入 NaHCO3 。此时常用 5.6% 或 7.4% 的 NaHCO3 溶液调节培养基，使之达到所要求的 pH 环境。 HEPES 溶液 HEPES （羟乙基哌嗪乙硫磺酸） 是一种弱酸，对细胞无毒性，主要 作用是防止培养基 pH 迅速变动。 在开放式培养条件下，观察细胞时培养基脱离了5% CO2 的环境 CO2 气体迅速逸出，pH 迅速升高，若加了HEPES，此时可以维持 pH7.0 左右。一般在进行克隆化培养时要添加 HEPES。 四、其他培养用液 抗生素 常用的是青霉素和链霉素，俗称 “双抗溶液”。 青霉素主要是对革兰阳性菌有效，链霉素主要对革兰阴性菌有效。加入 这两种抗生素可预防绝大多数细菌污染。 一般使用青霉素终浓度0.007～0.008g/100ml，链霉素终浓0.01g/100ml 配制成 100 倍浓缩液，可用 PBS 或培养基配制。 四、其他培养用液 五、环境和消毒 细胞培养中常用的仪器设备 无菌室 超净工作台 三重纯水蒸馏器 抽气泵 压力蒸气消毒器 电热恒温培养箱 CO2 培养箱 恒温水浴锅 倒置显微镜 离心机 无菌过滤器 洗刷装置 细胞计数板和电子细胞技术仪 五、环境和消毒 细胞培养的无菌环境 无菌室 无菌室的结构 一般由更衣间、缓冲间、操作间三部分组成。 无菌室的消毒和防污染 为保持无菌状态，经常消毒是必要的，通常采用每日（使用前紫外