第十章生物技术药物的质量控制与GMP.ppt

第十章 生物技术药物的质量控制与GMP管理 一、生物技术药物的质量控制 二、生物制药GMP管理 生物制品的管理 生物制品国家管理6项基本职能 1．完整的疫苗和生物制品审批程序和审批标准的法规文件； 2．审批结论要以实验和临床试验数据为依据； 3．国家质控当局对疫苗和生物制品出厂销售实行国家批签发制度； 4．要有对疫苗和生物制品进行质量评价的法定的实验检定机构和实验实施； 5．对生物制品生产企业实施GMP定期检查； 6．对生物制品有效性和不良反应进行上市后检测。 基因工程药物药物的质量控制 与传统意义上的药物生产不同，基因工程药物所获得的蛋白质，其相对分子量较大，并且多数是参与人体生理功能调节作用的蛋白质，极微量就可以产生显著反应，如白介素-12的作用剂量为0.1ug、干扰素的作用剂量也只须20-30ug。 基因工程药物在药性、药剂上的任何偏差，都有会带来严重的人体损伤和危害，因此，必须对于进行十分严格的质量控制和检测。 具体有以下5项内容： （一）原材料的质量控制 （二）培养过程的质量控制标准 （三）纯化过程中的质量控制 （四）目的产品的质量控制 （五）产品的保存要求 （一）原材料的质量控制 1、重组DNA序列的正确性。 2、进行重组的基因工程菌必须来自单一克隆株。 3、所使用的载体、质粒必须纯正、而且稳定。 4、应明确以下各事项：（1）目的基因的来源（2）限制性内切酶的种类（3）载体的名称和遗传特性（4）基因重组的位点图谱（5）抗生素标记物（6）宿主细胞的名称和来源、传代历史（7）重组染色体的生物特性、拷贝数、遗传性（8）基因表达所导读的核苷酸序列（9）启动克隆基因在工程细菌中的表达水平 （二）培养过程的质量控制标准 1、工程菌菌种纯正、稳定。 2、每一批次的菌种不含致癌基因，无杂菌、病毒、真菌和支原体的污染。 3、发酵生产过程中，工程菌表达稳定。 4、生产过程控制微生物污染。 5、生产过程保证产量恒定。保证工程菌的稳定性，确定细胞的最高传种代数。 6、定期检测工程菌的载体系统、质粒拷贝数、载体在工程细胞内是否丢失。 （三）纯化过程中的质量控制 1、每一批次生产产物的一致性检验。 2、外源蛋白质含量限度检验 3、DNA限度检验 4、热原限度检验： （1）血清学检验 （2）鲎试剂 （3）兔子热敏试验 （四）目的产品的质量控制 基因工程产品的质量控制包括7项指标。 1、产品鉴别的定性分析 2、纯度分析 3、杂质检测 4、生物活性测定 5、稳定性考察 6、产品一致性保证 7、产品的安全性 1、产品鉴别的定性分析 重组蛋白质药物常用的鉴定方法（8项检测） （1）电泳方法聚丙烯酰安凝胶电泳（SDS-PAEG）、等电点电泳、免疫电泳。（2）免疫学分析方法放射性免疫测定法（RIA）、放射性免疫扩散法（RID）、酶联免疫吸附法（ELISA），免疫印渍方法（immunoblotting）。（3）受体结合试验。（4）各种高效液相分析法（HPLC）。（5）肽图分析法。（6）氨基酸Edman N末端序列分析法（7）园二色谱方法（CD）（8）核磁共振（NMR） 下面选择其中重要的方法作讲解5种 （1）肽图分析 是通过酶解法、或者化学降解法的手段，对构成目的蛋白质的每一段肽链进行结构和成份分析的方法。 肽图分析法是检测蛋白质一级结构中细微变化最为有效的方法。可以作为基因工程产品与天然产品之间进行精密比较的鉴别手段。 方法上可采用：（1）各种高效液相分析法（HPLC），（2）毛细管电泳（CE） （2）氨基酸成份分析 这是一种对构成蛋白质的氨基酸单体进行测定的方法。 缺点和局限性：（1）对于由不超过50个氨基酸组成的蛋白质，其测定精度较好，（2）当氨基酸数量超过100个时，就会出现较大的偏差。（3）相对分子量越大，其偏差就越严重。这是因为构成蛋白质的肽链在水解过程中，有的水解并不完全，而有的则已经被破坏。 （3）部份氨基酸序列分析 氨基酸Edman N末端序列分析法，可以作为蛋白质和肽链和重要测定指标。 （4）重组蛋白质浓度、相对分子量测定 重组蛋白质的浓度测定方法有：（1）紫外分光光谱法，（2）双缩脲（BCA）法，（3）考马斯蓝法，（4）Loywry法，（5）凝胶染色与扫描分析法。 重组蛋白质的相对分子量测定方法有：（1）凝胶过滤法，（2）聚丙烯酰胺聚胶电泳法。 （5）蛋白质二硫键分析 二硫键的巯基与蛋白质的生物活性有着密切的关系。基因工程产物中的-S-S-键是否正确配对是一个重要的问题。 测定方法有：（1）对氯汞苯甲酸法（PCMB），（2）5、5-二巯基-双-2-硝基苯甲酸法（DTNB） 2、纯度分析 目的蛋白质含量测定通常根据目的