第十七章 遗传病的诊断演示文稿.ppt

第一节 遗传病的临床诊断 一、病史采集 家族史：有无同种病史； 婚姻史：婚龄、婚次、配偶健康情况及是否近亲结婚； 生育史：生育年龄、子女数目及健康状况，有无流产、死产和早产史 。 二、症状和体征 先天愚型：智力低下，伴有眼距宽、眼裂小、外眼角上斜等体征； 半乳糖血症：智力发育不全伴有白内障，肝硬化等； 常染色体病：智力发育不全，伴有生长发育迟缓、五官、四肢、内脏等方面的畸形； 性染色体病:性腺发育不全或有生殖力下降、继发性闭经、行为异常等。 除了解现在的症状和体征外，还应注意了解身体发育快慢、体重增长速度、智力增进情况、性器官及第二性征发育状态、皮肤纹理等。 系谱分析的意义 第二节 细胞遗传学检查 适 应 症 ①多发性先天畸形者； ②不明原因的智力发育不全、生长迟缓者； ③家族中已有染色体异常或先天畸形的个体； ④有反复多次早期流产史的妇女及其丈夫； ⑤原发性闭经和女性不育症； ⑥无精子症男子和男性不育症； ⑦两性内外生殖畸形者； ⑧有较长时间、较大剂量射线或致畸致突变物质接触者； ⑨恶性肿瘤，尤其是恶性血液病患者。 染色体检查---方法 取 材： 视检查对象和目的而有所不同，通常主要取自外周血、皮肤、骨髓、胸、腹水、绒毛、羊水中胎儿脱落细胞和脐血等各种组织。 方 法: 体外细胞培养 一定量的秋水仙素处理，经细胞收获、低渗、固定、滴片等过程，即可制备染色体标本。 显带 核型分析 二、性染色质检查 X染色质和Y染色质 适应症：两性畸形或性染色体数目异常疾病的初步诊断，但仍需染色体检查确认。 1、代谢产物分析 酶缺陷导致一系列生化代谢紊乱，从而使代谢的底物、中间产物、终产物、旁路代谢产物发生变化。因此，检测某些代谢产物的质和量的改变，可间接反映酶的变化而做出诊断。 2、酶和蛋白质分析 基因突变引起的单基因病主要是特定的酶和蛋白质的质和量改变的结果。因此，对酶活性的改变和蛋白质含量测定，是确诊某些单基因病的主要方法。 二、基因诊断基本方法 案例9-1基因诊断分析(P97) 2．Southern印迹杂交 分子印迹杂交(Southern blotting)的基本方法是将DNA标本用限制性内切酶消化后，经琼脂糖凝胶电泳分离各酶解片段，通过吸附作用将DNA从凝胶中转印至硝酸纤维素滤膜上。附着在滤膜上的DNA与32P标记的探针杂交，利用放射自显影术确定探针互补的每条DNA带的位置，以确定在众多酶解产物中含某一特定序列的DNA片段的位置和大小。 3．聚合酶链反应分析 （1）.已知点突变的检测 当某一致病基因的突变位点的性质以及突变位点两侧的碱基序列都明确的情形下，可以合成等位特异性的寡核苷酸探针，即ASO探针。 案例5-8基因诊断分析(P56) （2）未知点突变的检测 相同长度的单链DNA可因碱基序列不同产生构象差异，这在非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳中表现为迁移率的差别，称DNA单链构象多态性（SSCP）。 将突变区DNA片段PCR扩增后电泳，根据单链条带位置的改变判断该个体是否存在突变。但并不是所有的碱基突变都会导致SSCP，因此该方法不能鉴别所有突变。 （3）基因缺失的检测 基因缺失导致模版缺失，因此检测不到扩增产物，可以直接检测出。 案例9-2基因诊断分析(P99) DNA测序即测定DNA的一级结构中碱基的顺序。 包含特定位点的PCR产物再作DNA测序，比较正常基因与突变的序列，可检测出突变的碱基类型和位点。 6．荧光原位杂交（FISH） 案例17-1 罗xx ，女，34岁，曾生育过一个智力低下患儿，现再次妊娠，因惧怕再生同病患儿前来咨询。其患儿，男，6岁，智力低下，IQ值42。染色体核型分析为46，XY，-14，+t(14q;21q)。检查患儿父母染色体核型正常。脐血FISH分析结果如图。 表17-1 常用基因诊断方法 先天愚型(21三体综合征，Down syndrome) 单核苷酸多态性（SNP） 由于单个核苷酸改变而导致的核酸序列多态。 在人基因组中的发生频率比较高，在人类基因组中每100~300个核苷酸就有一个SNP。 有些SNP位点还会影响基因的功能，从而导致生物性状改变甚至致病。 数目变异的串连重复（VNTR） 重复序列以各自的核心序列（重复单元），首尾相连多次重复，称为串联重复序列，其重复次数在人群中存在变异，形成多态即 VNTR。 散在分布于染色体上，当用限制酶切割VNTR区时，只要酶切点不在重复区内，就可能得到各种长度不同的片段。 重复单位6~25bp长，称为小卫星DNA。重复单位2~6bp长，如（TA）n, (CGG)n等，称为微卫星DNA。 PAH