细胞培养及染色体制备.ppt

细胞培养及染色体制备 体外培养 培养细胞生命期 指的是细胞在培养中持续增殖和生长的时间，大致都要经历原代培养期、传代期和衰退期，生命期如何主要取决于细胞的种类，性状和原供体的年龄等。 原代培养：也称初代培养，指从体内取出组织细胞开始培养到第一次传代的时期，一般约1~4周，此期的细胞移动比较活跃，有细胞分裂但并不旺盛，且与体内相应的细胞性状相似，更能代表其来源组织的细胞类型及组织特异性。 原代培养是一系列的选择过程，最终将形成相对均一的细胞系。 传代培养：指将原代培养一定时间后的细胞分开接种至2个或更多的新的培养器皿中再培养称之为传代，一次传代约数天至一周，该期细胞增殖旺盛，并保留原有组织细胞的很多特性。 衰退期：有限细胞系经过长期反复传代，细胞增殖变慢而至停止分裂，该期细胞形态轮廓增强，色泽变暗，细胞质内出现暗的颗粒样结构以及空泡状结构，胞质突起回缩，最后衰退凋亡。 细胞培养—一代细胞生长基本过程 生长缓慢的潜伏期 增殖迅速的指数 增生期 生长停止的停滞期（平顶期） 细胞培养—贴附细胞的生长过程 潜伏期： 游离期-- 胞质回缩，胞体呈圆球形,10min一4h 贴壁期--细胞贴附并伸展，原代10-24h 潜伏期--有运动，细胞无增殖，分裂相少 指数增生期：分裂相增多，是进行各种实验最佳时期。 停滞期：密度抑制，细胞停止增殖，传代 贴壁生长型：必须贴附于支持物表面才能生长，是大多数动物细胞在体内生存和生长发育的基本方式，如羊水、绒毛等。 悬浮生长型：于悬浮状态下即可生长，不需要贴附于支持物表面，是少数动物细胞的生长方式，见于各种造血系统肿瘤细胞，淋巴细胞等。 细胞培养—细胞基本形态 贴壁型细胞：成纤维细胞型 上皮细胞型 游走细胞型 多型细胞型 悬浮型细胞：始终为球形 细胞培养—单个细胞增殖过程 细胞周期：DNA合成和细胞分裂 分裂间期： G1期（DNA合成前期） S期（DNA合成期） G2期（DNA合成后期） 有丝分裂期： 前期 20 ~30min 中期 20 ~30min 后期 5~6min 末期 20 ~30min 细胞培养—培养的基本条件 培养基：天然培养基 合成培养基 无血清培养基 成分—血清、营养物质、促生长因子等 PH值(7.2-7.4) 渗透压 合适的气体环境：开放培养—95%空气+5%二氧化碳 培养温度:人体细胞培养的标准温度为37℃±0.5 ℃ 细胞生长载体：试管培养 培养瓶、培养皿、多孔培养板等。 无毒、无污染 染色体：人类的遗传物质 染色体病:染色体畸变所致的疾病。 数目畸变 ：整倍体，非整倍体，嵌合体 染色体畸变类型 结构畸变：缺失、重复、倒位、易位等。 发生率：流产胚胎占50%、死产婴占8‰、新生儿死亡者占6‰、新生活婴占5-10‰、一般人群占5‰； 中期染色体的形态结构 每一中期染色体由两条染色单体组成，互称姐妹染色单体，各含一条DNA链，通过着丝粒连接，着丝粒将染色体划分为长臂(q)和短臂（p） 染色体显带技术 非显带技术使按照常规染方法制得的染色体标本，用Gimesa染色，使染色体均匀着色，主要特征为着丝粒的位置和染色体的相对长度，可发现整倍性和部分非整倍性核型，但无法精确辩认某一染色体的异常。 显带技术：将染色体标本经过一定程序处理，并用特定染料染色，使染色体沿其长轴呈现明暗或深浅相间的横行带纹，每对同源染色体的带型基本相同且稳定，非同源染色体的带型各不相同。 染色体显带技术是在非显带染色体的基础上发展起来的，它能显示染色体本身更细微的结构，有助于准确识别每条染色体及针对染色体异常疾病。 染色体显带技术发展至今，根据对染色体处理方法和染料的不同，已有十余种显带技术，包括G-显带、Q-显带，R-显带、T-显带(显示端粒)、C-显带(显示着丝粒)、N-显带(显示核仁组织区)，其它技术还有姐妹染色单体互换技术、染色体原位杂交