病毒学诊断与免疫预防教学课件.ppt

* * 病 毒 感 染 的 检 查 方 法 病毒感染的检查方法 病毒感染的时期与检查结果 病毒感染的时期 检查病毒及其成分 测定抗体 潜伏期及前驱期 发病初或急性期 恢复期及康复期 较难查见 较易查见 很难查见 未增多 未增多或 增多不明显 明显增多 （常超过4倍） 一、标本的采取与送检 （一）供分离病毒、检出抗原及核酸的标本： 1.尽早采取：发病初期 2.部位适宜：由感染部位采取 3.冷藏速送：装有冰块或干冰的容器内 4.本身带有杂菌 （如咽拭子、粪便）的标本，要进行病毒分离培养时，应使用抗生素。 （二）供检测特异性抗体的标本：应在发病初期和恢复期各取 1 份血清。 动物接种 ——动物模型 鸡胚接种 细胞培养 原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞培养 三大培养方法 二、病毒的分离与鉴定 （一）病毒的分离培养 1. 动物接种 是最原始的病毒培养方法，根据病毒种类不同，选择敏感动物及适宜接种部位，如嗜神经性病毒（乙脑病毒、狂犬病病毒）可接种于小鼠脑内，痘病毒可接种于家兔角膜或皮内。 乙脑V小白鼠脑内接种 （1）优点：结果易观察，可建立动物模型。 （2）缺点：有饲养条件要求，费用高、动物体内常带有潜伏病毒。 2.鸡胚培养： 受精鸡蛋 39℃ 8～12d 形成鸡胚 接种含V标本， 37 ℃培养 途径：尿囊腔 羊膜腔 卵黄囊 绒毛尿囊膜 V增殖 鸡胚病变 鸡胚死亡 尿囊液等含V 优点：来源易，经济； 缺点：易感病毒范围窄； 常用于流感病毒及腮腺炎病毒等的分离培养。 3.细胞培养：最常用 原代细胞培养 二倍体细胞培养 传代细胞培养 （1）原代细胞培养 直接从生物体内获取组织细胞进行的首次培养称为原代细胞培养，即从体内取出组织接种培养到第一次传代阶段，一般持续 1～4周。 此期细胞呈活跃的移动，可见细胞分裂，但不旺盛 ——来源困难。原代培养细胞离体时间短，性状与体内相似，是检测药物很好的实验对象。 （2）二倍体细胞株：由一物种正常组织细胞的原始培养物得到的细胞群，在体外分裂50 ～ 100代后至少有75％以上的细胞与该物种的正常细胞（2n）的核型一致，但经多次传代后也会出现老化、死亡。广泛用于病毒分离和疫苗制备。 （3）传代细胞系：是指来自人或动物的肿瘤组织或正常组织的细胞，其染色体组型发展为非整倍体或二倍体低于75％，在体外具有无限传代的生命力。通常具有异种移植的能力和较广泛的病毒敏感性，但不能用于生产疫苗。