肝细胞移植的临床应用.doc

肝细胞移植的临床应用 【摘要】? 50多年前Sorrentino第一次用机械的方法把新鲜肝组织制成匀浆，并在体外进行药物实验，开创了肝脏功能的体外人工支持时代。Berry和Friend 等在1969年用自己配置成的消化液进行大鼠肝灌注第一次完整分离肝细胞。几十年来，肝细胞的分离培养及保存技术不断优化并为相关的肝脏研究和肝脏疾病的治疗提供了极为宝贵的途径。尤其是近年来肝细胞移植的实验和临床应用不断取得进展，为肝脏疾病的治疗展现了诱人的前景。优化和完善肝细胞的分离，培养和保存，仍然是关系到肝细胞移植效果的前提。近年来，不少的研究者正致力于临床的应用研究。根据所收集到的文献报道，世界各大医学中心目前已有近80例肝细胞移植的临床应用，其结果令人鼓舞。可以预测，肝细胞移植作为整体器官移植的“桥梁”或替代治疗，将给众多肝病患者带来福音。本文就近年来肝细胞移植的临床应用研究进展作一综述。 【关键词】? 肝细胞 分离 细胞培养 移植 临床应用 ??? 肝脏是机体最重要的器官之一，在生理和病理状态下，它是能量代谢、解毒以及血浆蛋白合成的中心。当发生急性肝功能衰竭时，只有15%～25%的病人得以生存［1］。许多慢性肝脏疾病如肝硬化、肝癌等也最终导致肝脏功能的衰竭。长期以来，国内外学者注重于肝器官移植的研究, 因为肝移植疗效显著，1年存活率可达70%以上。但肝移植对技术条件、适应证及组织相容性等要求较高, 加之肝供体的短缺，使肝移植的临床应用严重受限。因此，临床上急需其他方法，作为“桥梁”来缓解和改善肝功能，延长患者的生存时间，而等待肝移植，甚至取代肝移植。由此，肝细胞移植及生物人工肝的研究成为热点［2,3］。不管是肝细胞移植或生物人工肝，肝细胞的分离、培养和保存是肝细胞临床应用的基石。就肝细胞分离培养和保存尤其是肝细胞移植的临床应用研究进展现综述如下。 ??? 1? 肝细胞分离培养与保存 ??? 1.1? 肝细胞的来源 ??? 1．1.1? 人肝细胞? 人类肝脏细胞是最好的供体，因为肝脏细胞分化较高，有较好的合成和代谢功能［4］ ，因此肝细胞移植首选人肝细胞。但由于供体的严重短缺，目前用于肝细胞移植的供体多为不适于肝移植供体（untransplantable liver），如脂肪肝、纤维化肝、受外伤肝等，这些细胞体外培养增殖困难，肝细胞功能效果不理想。胎肝细胞（fetal liver cell，FLC）在体外可以扩增，在刺激下可分化，免疫原性弱。取自妊娠26周和34周引产的胎肝细胞, 检测其活性为95%, 代谢能力为成人的75%［5］ 。但其来源也很受限，且存在伦理问题。 ??? 1．1.2? 动物肝细胞? 为解决供体缺乏的问题，多年来研究者正致力于异种肝细胞移植的研究。动物肝细胞来源广泛，分离简便，效果可靠，Donato等［6］测定了人肝细胞、猪肝细胞、犬肝细胞、兔肝细胞、鼠肝细胞等钆细胞中细胞色素P450的含量及代谢能力，猪肝细胞和人肝细胞的代谢功能最接近。然而异种移植用于临床仍有许多问题待解决。其一，猪肝细胞的内源性逆转录病毒感染受体，其安全性须进一步研究。其二，动物肝细胞不可能替代人类血浆蛋白合成酶活性，并存在有种间的特异性差异,并且异基因蛋白和酶进入到血循环中也能产生副作用［7］；为避免这种差异反应，病人血液和动物肝细胞之间必须有安全屏障,即半透膜的存在。故目前动物肝细胞多作为生物人工肝的生物成分而起作用［8］。 ??? 1．1.3? 肝干细胞? 1958年Wilson和Leduc［9］提出肝干细胞的概念。近年来，研究发现肝干细胞移植对急慢性肝脏疾病有一定的治疗作用，使之成为肝脏领域的研究热点［10］ 。根据肝脏干细胞起源的不同，可将其分为肝源性肝脏干细胞和非肝源性肝脏干细胞，前者包括卵圆细胞、分化的肝细胞、胚胎肝细胞和胆管上皮细胞，后者则为源于胚胎干细胞、骨髓造血干细胞及胰腺上皮干细胞等不同来源的肝脏干细胞。在特定条件下，造血干细胞和骨髓间充质细胞均可转化成肝细胞。 ??? 动物实验证实, 肝干细胞在急性肝损伤时参与了肝脏肝细胞的再生和修复，并发挥了至关重要的作用，这样使肝干细胞移植用于临床治疗急性肝衰竭及肝代谢性疾病成为可能［11］。但肝干细胞用于临床还有许多问题待解决，诸如肝干细胞在体外的鉴别、分离、培养及筛选，干细胞的多向分化潜能及可塑性这一生物学现象的发生和调控机制仍不清楚，干细胞移植的数量，移植后在体内的归巢及定位等。相信随着研究的深入，肝干细胞希望能代替肝细胞的作用并应用于临床治疗。 ??? 1.2? 肝细胞的分离和培养 ??? 1.2.1? 肝细胞的分离? 1969年，Berry和Friend 等人用无钙的平衡盐、胶原酶和透明质酸酶配置成的消化液进行大鼠肝灌注，获得到肝细胞。之后，Seglen 创立了两步灌流法，即首