华南师范大学试验报告.doc

华 南 师 范 大 学 实 验 报 告 学生姓名 叶洁丽 学 号 20070004006 专 业 综合理科二班 年级、班级 2007级 课程名称生物化学与分子生物学实验指导实验项目酶的特异性和影响酶反应速度的因素 实验类型 □验证 □设计 □综合 实验时间 2008 年 10 月 20 日 实验指导老师 陈文利 徐杰 实验评分 一、目的 1、了解酶的特异性。 2、了解温度、pH值、激活剂和抑制剂等因素对酶反应速度的影响。 3、掌握检查酶的特异性，酶的激活剂和抑制剂影响酶反应速度的方法及原理。 4、学习测定酶最适pH值的方法。 二、原理 酶是生物体中具有催化功能的蛋白质，因此也叫生物催生剂。生物体内存在多种多样的酶，从而使生物体在温和的条件下能迅速完成复杂的生物化学反应。 酶具高度的特异性。所谓特异性是指一种酶能对一种化合物或一类化合物起催化作用，而不能对别的物质发生催化反应。 淀粉和蔗糖无还原性。唾液淀粉酶水解溶粉生成有还原性的麦芽糖，但不能催化蔗糖水解。蔗糖酶能催化蔗糖水解产生还原性的葡萄糖和果糖，但不能催化淀粉水解，用Benedict试剂检查糖的还原性。还原性糖能与Benedict试剂反应,生成砖红色的氧化亚铜沉淀。（注：Benedict试剂中的无水碳酸钠是为了提供碱性的环境，柠檬酸钠提供柠檬酸根用作螯合剂，与铜离子络合防止形成氢氧化铜沉淀。） 温度和pH对酶的活性有显著的影响，使反应速度达最大反应值时的温度称为某种酶作用的最适温度。大多数动物酶的最适温度为37℃~40℃，植物酶的最适温度为50℃ 酶的活性常受某些物质的影响，能使酶活性增加的物质称为酶的激活剂，能使酶的活性降低的物质称为酶的抑制剂。氯离子为唾液淀粉酶的激活剂，铜离子为其抑制剂。 三、材料、试剂与器具 （一）材料 1、干酵母 2、黄豆粉 （二）试剂 1、2%蔗糖溶液 2、0.3%氯化钠的1%淀粉溶液（新配制） 3、释释200倍的新鲜唾液（5滴唾液，加蒸馏水稀释至50毫升） 4、蔗糖酶溶液 5、本尼迪克特试剂（Benedict） 6、0.1%淀粉溶液 7、1%氯化钠溶液 8、1%硫酸铜溶液 9、1%的硫酸钠溶液 10、碘化钾—碘溶液（稀） 11、0.3%氯化钠0.2%淀粉溶液 12、1%尿素溶液 13、脲酶提取液 14、奈斯勒试剂 15、0.3%氯化钠的0.5%淀粉溶液（新配制） 16、0.2M磷酸氢二钠溶液 17、0.1M柠檬酸溶液 （三）器具 1、试管及试管架、试管夹 2、移液管若干 3、冰浴 4、恒温水浴 5、白瓷板 6、秒表 7、水浴锅 8、烧杯、量筒 四、操作步骤、实验现象以及结果分析 （一）酶的特异性 1、淀粉酶的特异性实验 取试管6支，编号，按下表进行操作 管号 1 2 3 4 5 6 1%淀粉溶液（滴） 4 4 4 2%蔗糖溶液（滴） 4 4 4 稀释唾液（ml） 1 1 煮沸过的稀释唾液（ml） 1 1 蒸馏水（ml） 1 1 37℃ Benedicty试剂（ml） 2 2 2 2 2 2 沸水浴2~3分钟 现 象 蓝色溶液 蓝色溶液 棕褐色浊液 蓝色溶液 蓝色溶液 蓝色溶液 解释现象 没有加催化剂，淀粉溶液没有水解 没有加催化剂，蔗糖溶液没有水解 加入稀释唾液后，淀粉溶液被水解成具有还原性的麦芽糖 稀释唾液不能催化蔗糖溶液水解 高温使稀释唾液失去活性，不能催化淀粉水解 高温使稀释唾液失去活性，同时稀释唾液具有专一性，不能催化蔗糖水解 2、蔗糖酶的特异性实验 取试管6支，编号，按下表进行操作 管 号 1 2 3 4 5 6 1%淀粉溶液（滴） 4 4 4 2%蔗糖溶液（滴） 4 4 4 蔗糖酶溶液（ml） 1 1 煮沸过的蔗糖酶溶液(ml) 1 1 蒸馏水（ml） 1 1 37℃ Benedict 试剂(ml) 2 2 2 2 2 2 沸水溶2-3分钟 现 象 蓝色溶液 蓝色溶液 摇晃后沉淀消失，变成绿色溶液 不透明橙黄色浊液 绿色溶液 绿色溶液 解释现象 没有加催化剂，淀粉溶液没有水解 没有加催化剂，蔗糖溶液没有水解 淀粉没有水解 蔗糖酶催化蔗糖水解 淀粉没有水解 蔗糖没有水解 分析：酶具