发光免疫分析试剂生产及质量控制技术指导原则.doc

附件2： 体外诊断试剂生产及质量控制技术指导原则 ——发光免疫分析试剂生产及质量控制技术指导原则 （征求意见稿） 发光免疫分析试剂是指利用特异的抗原抗体反应等生物学原理，利用发光信号来进行检测的一类试剂。主要包括化学发光（酶促，非酶促），电化学发光和时间分辨荧光等法。 该指导原则主要适用于用发光分析技术对蛋白质等被测物质进行检测的第三类试剂生产及质量控制。第二类试剂的生产及质量控制可参考该指导原则执行，国家食品药品监督管理部门将依据科学技术发展的需要，适时组织修订。 一、基本原则 （一）研制、生产用的各种原料、辅料应当制定相应的质量指标，并应符合有关法规的要求。 （二）诊断试剂的生产必须按《药品生产和质量管理规范》及（体外诊断试剂生产实施细则）组织生产；企业应具备相应的专业技术人员，相适应的仪器设备和生产环境。 （三）诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则组织研发，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。 （四）研制生产过程中所用的材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。 （五）生产和质量控制总体目标应保证产品使用安全，质量稳定，工艺可控，使用有效。 二、辅料质量控制 该部分应列出主要原材料质量控制要点，关键原材料，如抗原，抗体等应注明来源，性质，质控指标等，生物原料应保证其生物安全。 （一）主要生物原料 与生产的产品质量最密切相关的生物原料包括各种活性抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。这类原料可用于包被微孔反应板、标记相关标记物及中和反应用抗原、或进行校准品配置等。一般按工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量要求。原料供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料的供应商有变更，必须进行原料验证，并进行申报。常规检验项目一般包括： 1、外观 肉眼观察，大部分生物原料为澄清透明的液体，不含异物，不得浑浊，不得有摇不散的沉淀；或者为冻干品。白色粉末，不含有其他颜色的杂质；特殊生物原料应具备相应外观标准。 2、纯度和分子量 主要通过SDS电泳进行检测，根据所检测生物原料的分子量选择适宜丙烯酸胺凝胶浓度进行电泳。一般情况下，每个电泳道加样量为2?10 ?g，同时用已知分子量标准蛋白质作参照，采用适宜的电泳电流、电压和电泳时间；电泳后的凝胶可用考马斯亮蓝 3、蛋白浓度 蛋白浓度可用生理盐水稀释，用紫外分光光度计在波长280nm处检测出吸光值，计算出蛋白浓度,或采用其它适宜方法进行测定,应符合相应规定的要求。 4、效价 效价的测定一般根据蛋白含量测定结果通过倍比稀释法测定。效价应达到规定的要求。 5、功能性实验 功能性实验是指该生物原料用于相应的试剂盒试剂实际生产中的情况，一般考查该原料使用后的试剂盒的灵敏度、特异性和稳定性等，并比较和以前批号原料的相关性。 （二）生物辅料 生物辅料指的是在生产过程中作为蛋白保护剂用途的一类生物原料、主要包括牛血清、羊血清、牛血清白蛋白等。这些生物原料的质量标准应符合2000年版的《中国生物制品主要原辅材料质控标准》上规定的标准要求，并且要适合于本企业的生产。 1、牛血清或羊血清 外观：为浅黄色澄清稍粘稠的液体,无溶血或异物。 无菌试验：将血清直接放到37℃培养7天，放在明亮处观察, 不得出现浑浊 总蛋白含量：用双缩脲方法来测定，标准为不小于32mg/ml。 球蛋白含量：取待测血清1ml，加入0.85％的NaCl溶液。加入饱和硫酸铵1ml，置4℃，2小时，8000rpm离心10分钟，弃上清。沉淀溶于0.85％NaC1溶液至1ml，用Lowry方法测定蛋白含量，不能大于2mg/ml 功能性实验：10％血清稀释液作为样本进行测定，不得出现非特异性反应。 2、牛血清白蛋白 外观：应为浅黄色冻干粉末，无吸潮，无结块，无肉眼可见的其他杂质颗粒。 溶解性：将牛血清白蛋白配成10％溶液，溶解时间应不大于15分钟。1％水溶液的pH值：6.5?7.1；1％水溶液OD403值：＜0.15。 总蛋白含量：用双缩脉方法来测定，质量标准为≥95％。 硫酸铵含量：纳氏试剂法测定，通过用标准硫酸铵曲线可查出硫酸铵含量，其标准为≤0.1%。 尿素含量：采用二乙酸一肟法测定，通过用标准尿素曲线可查出尿素含量，其标准为≤0.1%。 总蛋白中的BSA含量：采用硝酸纤维素膜电泳法。其标准为95％以上。 BSA的净含量：总蛋白含量乘总蛋白中的BSA含量，其标准为≥90％。 3、酪蛋白 酸度：应符合标准。 功能性实验：10％酪蛋白作为样本进行测定，不得出现非特异性反应。 4、标记用酶 根据不同生产厂家的检定方法和质量标准进行检定，RZ值要大于2.8。 （三）化学原材料 参照《中国生物制品主要原辅材料质控标准》分析纯级别检定。主要的检测指标包括一些基本的一般盐类检测、溶液PH