川贝枇杷糖浆的限量检测.ppt

配制培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 注：1.在加入药品后微温溶解，滤过后加入玫瑰红钠、葡萄糖 2.玫瑰红钠固体在加入1000ml水时加入0.0133g 玫瑰红钠液体在加入1000ml水时应加入10ml 注释 ??? 蛋白胨提供碳源和氮源；葡萄糖提供能源；磷酸二氢钾为缓冲剂；硫酸镁提供必须的微量元素；玫瑰红钠作为选择性抑菌剂可抑制细菌的生长，并可减缓某些霉菌因生长过快而导致菌落漫延生长；琼脂是培养基的凝固剂.同时玫瑰红钠可供霉菌和酵母菌的计数，但霉菌的生长可抑制其他菌种的生长，故在玫瑰红钠培养基中处于优势生长地位。 葡萄糖琼脂养基培 清洗、烘干、制无菌水 1.清洗培养皿、移液管、试管（清洗移液管要将管内的水滴甩干净，以防烘干时耗时过长） 2.将培养皿、移液管放于烘箱中烘干 3.在4支试管中分别加入9ml蒸馏水，塞紧，用纸包扎，一会灭菌 包扎、灭菌 1.烘干的移液管，在管口处塞上棉花，不能松也不能紧，然后与报纸成30度至45度包扎起来 2.将烘干的8个培养皿包扎起来 3.将培养基、培养皿、移液管、试管一起放入灭菌锅内灭菌30分钟(121℃、103kPa) 稀释样液 1.将8个培养皿分为4组，编号1、2、3、4 2.将移液管、试管分别编号1、2、3、4 3.1组，用1号移液管在1号试管中取无菌水，分别向1组培养基中加入1ml无菌水 2组，用1号移液管取1ml的川贝枇杷糖浆注入2号试管，用2号移液管吹打混匀，再分别取1ml样液于2组培养皿中 3组，用2号移液管在2号试管中取1ml样液注入3号试管中，用3号移液管吹打混匀，再分别取1ml样液于3组培养皿中 4组，用3号移液管在3号试管中取1ml样液注入4号试管中，用4号移液管吹打混匀，再分别取1ml样液于4组培养皿中 倒平板、培养 1.在无菌环境中将培养基倒入培养皿中 注：培养皿要持平，到后盖上皿盖，放在试验台上正反旋转几次，以 使培养皿中液体混匀 2.将培养皿放于培养箱中培养72小时 观察、计数 一、菌落计数 1.选取菌落数在30CFU-300CFU之间、无蔓延菌落生长的平板计数菌落总数 2.低于30CFU的平板记录具体菌落数，大于300的可记录为多可不记，每个稀释度的菌落数应采用两个平板的平均数。 3.其中一个平板有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平板作为该稀释度的菌落数；若片状菌落不到平板的一半，而其余一半中菌落分布又很均匀，即可计算半个平板后乘以2，代表一个平板菌落数。 4.当平板上出现菌落间无明显界限的链状生长时，则将每条单链作为一个菌落计数 二、菌落总数计算方法 1.只有一个稀释度平板的菌落数在适宜计数范围内，计算两个平板菌落数的平均值，再用平均值乘以相应稀释倍数，作为每克（或毫升）中菌落总数结果。 2.若有两个连续稀释度的平板菌落数在适宜计数范围内，按下式计算 稀释10倍 稀释100倍 结果 1.稀释10倍 菌落数大于300，不计 2.稀释100倍 菌落数分别为150、132 3.稀释1000倍 菌落72，另一培养皿倒平板时培养基部分凝固导致培养失败 1000ml+ 200ml 10g+2g 10ml+2ml 0.5g+ o.1g 1g+o.2g 14g+2.6g 5g+1g 水 葡萄糖 玫瑰红钠 硫酸镁 磷酸氢二钾 琼脂 蛋白胨 1000ml 20g 5g 14g 5g 水 葡萄糖 酵母菌膏 琼脂 蛋白胨 注：加入药品后，微热温溶解，滤过后再加入葡萄糖 N=∑C/(n1+0.1n2)d 平板菌落数之和 第一平板菌落数 第二平板菌落数 稀释因子 空白对照 稀释1000倍