外界因素对酶活性的影响.ppt

外界因素对酶活性的影响 一、实验目的 1.了解外界因素对酶活性及酶促反应速度的影响 2.加深对酶特性的认识。 ?二、实验原理 酶的化学本质是蛋白质，它极易受外界条件的影响而改变它的构象及性质，因而也必然会影响到它的催化活性。酶对温度、 pH、酶浓度及某些离子浓度等变化很敏感。 (一)pH值对酶活性的影响 酶的活性受环境pH的影响极为显著，通常各种酶只有在一定的pH范围内才能表现出它的活性。一种酶表现其最高活性时的 pH值称为该酶的最适pH。高于或低于最适pH值时，酶的活性降低。酶的最适pH值受酶的纯度、底物的种类和浓度、缓冲液的种类和浓度以及环境温度等条件影响。 (二)温度对酶活性的影响 每种酶都有其最适温度，高于或低于此温度酶的活性都降低。一般而言，若酶处于过高的温度环境中，会使酶活性永久地丧失；而若处于极低温度的环境中只会使酶活性受到抑制，一旦温度适宜，酶又会全部或部分地恢复其活性。 (三)酶浓度对酶促反应速度的影响 在其它条件不变的情况下，若反应物浓度大大高于酶浓度时，则反应速度随酶浓度增加而增加，两者间成正比关系，即：V=k[E] 但若反应底物浓度较低，而且酶的浓度足够高时，增加酶浓度，反应速度基本不变。 (四)离子对酶活性的影响 就唾液淀粉酶而言，低浓度Cl一可以增加酶活性，高浓度的Cl一或者低浓度的Cu2+则会抑制酶的活性，而低浓度的Na+、SO42-等对酶活性没有影响。不同的酶对不同的离子具有不同的效应。 三、实验操作 (一)pH对酶活性的影响 1．缓冲溶液的配制 取6只洁净的三角烧瓶，按表1编号和加试剂： 表1.磷酸氢二钠一柠檬酸缓冲溶液的配制 (二)温度对酶活性的影响 取3支洁净试管，按表3操作： 表3温度对酶活性的影响 (三)酶浓度对酶活性的影响 1．取3支洁净试管，编号，按表4加入淀粉液，缓冲液，加毕后放人37℃恒温水浴中保温5 min。 表4 酶浓度对酶活性的影响 (四)离子对酶活性的影响 取3支洁净试管，编号后按表5操作： 表5 离子对酶活性的影响 四、实验建议 (1)因各人的唾液淀粉酶活性有所差异，若某一碘液检验结果为全部变为淡黄色，或无一变为淡黄色，则需增大或减少唾液稀释倍数，或者改变酶作用时间。 (2)配制缓冲液时，吸量要准确。 (3)检验离子对酶活性影响时，切勿吸错或污染了试剂。 五 实验报告及作业 1．以反应速度为纵坐标，pH值、温度或酶浓度为横坐标，作出反应速度和pH，温度或酶浓度的关系图。 2．唾液淀粉酶的最适pH和最适温度是多少？如何进一步确定？ 3.温度为0℃和100℃两支试管中反应液遇碘呈蓝色，其原因有何不同？若恢复最适温度，其结果为什么有差异？ 4.如何确定氯化钠中氯离子是激活剂，硫酸铜中铜离子是抑制剂？ 5.什么是酶的最适温度、最适pH，有何实践意义？温度、pH的改变对酶活性有何影响？ 6.为什么最适温度不是一个物理常数？最适pH是否为一个常数？ 7.进行酶的实验必须注意控制哪些条件？为什么？ * * 8.85 0.1 mol／L柠檬酸(m1) 11.15 0.2 mol／L磷酸氢二钠(m1) 8.0 7.4 7.0 6.8 6.2 5.4 pH值 6 5 4 3 2 1 三角烧瓶号 2.取6支洁净试管，分别编号后，按表2操作： 表2 pH对酶活性的影响 实验结果 充分摇匀 1 2 2 2 2 2 碘液(滴) 37℃保温，l min后，用滴管从3#管中吸l滴反应液，放白瓷板用碘液检验(1滴)。以后每隔1min检验一次。当3#管反应液遇碘液呈淡黄色时，立即向6支管中加碘液 充分摇匀 2 2 2 2 2 2 稀释100倍唾液(m1) 2 2 2 2 2 2 含NaCl的0.5％淀粉(m1) 3 3 3 3 3 3 缓冲液量(m1) 8.0 7.4 7.0 6.8 6.2 5.4 pH值 6 5 4 3 2 1 管 号 放置15min 再分别从1、2、3管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果 15min 作用时间 37℃ 37℃ 37℃ 改变处理温度至 分别从l、2、3支试管中取出一滴在白瓷板上用碘液检验结果 37 ℃ 10 0℃ 0℃ 立即处理温度 1 1 1 稀唾液1：50(m1) 2 2 2 含NaCl的O.5％