多聚嘧啶序列结合蛋白PTB抑制HBV转录后调节元件HPRE的功能.doc

编号：200810142 刊用形式： 多聚嘧啶序列结合蛋白（PTB）抑制HBV转录后调节元件（HPRE）的功能 程丽英 万涛 黄婷婷 蔡雪飞 张文露 黄爱龙 汤华（重庆医科大学感染性疾病分子生物学教育部重点实验室，重庆400016） 摘 要：目的 探讨多聚嘧啶管束序列蛋白(polypyrimidine tract binding protein, PTB)对乙型肝炎病毒转录后调节元件（HBV posttranscriptional regulatory element, HPRE）功能的影响。方法 我们用pDM138-HPRE CAT（chloramphenicol acetyl transferase）报告体系，通过质粒瞬时转染细胞的方式来探讨PTB对HPRE功能的影响。结果 CAT 活性检测表明：PTB的过表达使HPRE介导的CAT表达活性下降，并且呈剂量依赖性。当去除质粒上游剪接供体位点时，PTB仍然可以降低CAT的活性。结论 PTB抑制 HPRE的功能，并且这种抑制作用不依赖于上游剪接供体位点的存在。 关键词：乙型肝炎病毒，多聚嘧啶管束序列蛋白(PTB)，HBV转录后调节元件(HPRE)，CAT检测，瞬时转染 中图法分类号：R373 文献标识码:A Polypyrimidine Tract Binding Protein Negatively Regulates the Function of HBV Posttranscriptional Regulatory Element Cheng Liying, Wan Tao, Huang Tingting, Cai Xuefei, Zhang Wenlu, Huang Ailong and Tang Hua (Key Laboratory of Molecular Infectious Diseases, Ministry of Education, Chongqing Medical University, Chongqing 400016, China) Abstract: Objective To reveal the role of PTB interaction with HPRE. Methods CAT expression plasmid pDM138-HPRE system was used. Transient co-transfection was adopted to identify the role of PTB in HPRE regulated gene expression. Results Functional analysis indicated that PTB could dose-dependently inhibit HPRE function in pDM138-HPRE CAT assay system. PTB was still able to depress CAT activity when upstream splice donor site was deleted. Conclusion Our data demonstrated that PTB inhibits function of HPRE, and this inhibition is independent on upstream splice donor site. Key words: Hepatitis B virus, HBV posttranscriptional regulatory element (HPRE), polypyrimidine tract binding protein (PTB), CAT assay, transient transfection 为了在转录和转录后水平更有效的控制自身基因表达和复制，很多病毒都包含多个基因和顺式调节元件等复杂的调控机制[1]。最典型的就是逆转录病毒。例如：人类免疫缺陷病毒（HIV-1）的Rev反应元件（Rev response element, RRE）、猿猴逆转录病毒的组成性出核元件 基金项目：国家自然科学基金(No Supported by the National Natural Science Foundation of China 作者简介：程丽英（1984-），女，山东省聊城市人，硕士研究生，主要从事乙肝病毒基因表达调控方面的研究。电话E-mail： chengli