D-D二聚体测定标准操作程序.docVIP

XXXX医院检验科 D-二聚体测定作业指导书 PAGE PAGE 5 文件编号 制定日期 文件版次 正文页数 附件份数 第一版 5 D-二聚体测定作业指导书 修 订 记 录 修订日期 版次 页次 修订内容 第一版 全部 发行章 批准 审核 编制 制定部门 检验科 文件持有部门：检验科临检室 D-二聚体测定 （分析仪器法） 实验原理：免疫比浊法 当混合标本中含有D-二聚体时，聚苯乙烯颗粒包被到单克隆抗体（DD5），与交联纤维蛋白降解产物（D-二聚体）的交联区域结合。交联区域呈立体结构，有两个单克隆抗体表位。总之，一个单克隆抗体就能触发凝集反应，随后检测浊度的增加。仪器在575nm处通过对浊度改变的监测，将吸光度转换成浓度值，由此获得样本中D-二聚体的量。 标本采集 2.1 早晨空腹采血(空腹12小时左右),静脉采血。 2.2 3.8％(w/v)枸椽酸钠0.2ml+静脉血1.8ml,混匀。 标本存放 1小时内(3000r/min×15min)分离血浆,室温放置不超过2小时,2～8℃保存不超过4小时，长时间保存需在冰冻条件下，（-70℃不超过6个月）,只能冻融1次，在 标本运输：低温条件下运输。 标本拒收的标准:抗凝剂不符合,采血量不准确,凝固,溶血,脂血标本不能作测定。 6. 实验材料: 6.1 德国Dade Behring Marburg 公司D-Dimer PLUS乳胶试剂, 用4mlD-二聚体PLUS复溶液溶解一瓶D二聚体PLUS试剂，室温（15℃~25℃）放置约5分钟，并不时混匀。将试剂放于仪器相应的试剂位置上。未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8℃保存不超过 6.2 D-Dimer PLUS加速剂：用5ml蒸馏水溶解，室温（15℃~25℃）放置约15分钟，并不时混匀。将试剂放于仪器相应的试剂位置上。使用前，轻轻振荡试剂。未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，复溶试剂2～8 6.3 D-Dimer PLUS复溶液：液体。用于溶解D-二聚体PLUS 乳胶试剂。未开封试剂2～8℃贮存到说明书上有效期，开瓶后试剂2～8℃保存不超过 6.4 Dade D-二聚体质控血浆I/II.用蒸镏水1ml溶解后放置30分钟,才能使用或分装。复溶后,室温保存2小时,2～8℃ 7. 仪器设备: 7.1 仪器名称: Sysmex CA-1500全自动血液凝固分析仪 7.2 仪器厂家:日本Sysmex公司 7.3 仪器型号:Sysmex CA-1500 7.4 仪器技术参数: 7.4.1 速度: 最快检测速度180测试/小时,组合检测约140测试/小时 7.4.2 试剂位:36个,具冷藏功能。 7.4.3 样本位:50个,可自动连续添加。 7.5 仪器校准程序: 7.5.1 校准频率:当方法改变,试剂厂家或试剂批号改变,仪器维修影响测定结果等情况时,必须进行校准。 7.5.2 校准操作:设置标准曲线分析(由仪器提供商指定工程师执行) 8. 操作步骤: 8.1 检查前准备: 8.1.1 清空废液瓶,清空反应杯抛弃槽。 8.1.2 添加足够反应杯(不能超过警告线)。 8.1.3 添加清洁液试剂,清洗用蒸馏水等。 8.2 开机 先开打印机再开主机,开机后仪器自检,约15分钟,屏幕上方“Not Ready”变为“Ready”,表示仪器预热完成,进入系统准备工作状态,可进行测定。 8.3 输入工作清单: 从主菜单选Work List→出现第一架样本工作清单输入画面,选ID No Entry输入第一个样本号→按相应实验项目名称键D-D,并同时输入此标本的其他测试项目,若选“凝血四项（PT、APTT、Fbg、TT）”，可按Profile #1组合选项选择，选中项目相应位置标记为“○”，选完项目后按ENTER确认，要删除某项目时只需按该项目（按键如PT○变为PT-）即可，→用↑↓键，同样输入其他标本编号项目。（快速输入可用Repeat键，输入重复标本数，复制同样项目的输入。 8.4 放置样本 按8.3所设好的工作清单顺序将离心分离好的样本放置于样本架上,并按顺序把样本架排列于Sampler进样器右边位置(最多同时放5架共50个样本) 8.5 按Start键开始测定. 盖好遮光盖,确认仪器为准备状态(显示屏正上方显示“Ready”)按Start键,进样开始,→测定进行,仪器显示为“Analying”(被选择项目背景变为“◎”，此时可重复8.3,8.4,继续输入其他架样本工作清单,按Rigester,继续确认测试任务,添加样本架继续测试,→测定完成,测定项目背景变为“●”，打印机打印出测定结果，所有测定清单完成，系统恢复“Ready”状态。 8.6