香菇多糖的制备许祥博.ppt

一、含义 又称香蕈、椎耳、香信、冬菰、厚菇、花菇，英文名：Lentinan。香菇是我国传统的著名食用菌，在世界上最早人工驯化栽培。香菇营养丰富，味道鲜美，被视为“菇中之王”。其中含 香菇多糖 有十多种氨基酸，其中有异亮氨酸、赖氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、苏氨酸、缬氨酸等7种人体必需的氨基酸，还含有维生素B1、B2、PP及矿物盐。 二、成分功能 香菇多糖是从优质香菇子实体中提取的有效活性成分，香菇多糖中的活性成分是具有分支的β— (1—3)—D—葡聚糖，主链由β—(1—3)—连接的葡萄糖基组成，沿主链随机分布着由β—(1—6)连接的葡萄糖基，呈梳状结构。研究表明香菇的活性多糖成分β—(1—3)—D— 葡聚糖对抑制异源的、同源的、甚至是遗传性的肿瘤都有效。 分子式：(c6h10o5)n ，分子量：40～80万。香菇的主要成分是多糖类和不饱和脂肪酸，还含有大量的可转变为维生素D的麦角甾醇和菌甾醇，经热水提取的香菇多糖可调节人休内有免疫功能的T细胞活性，可降低甲基胆蒽诱发肿瘤的能力。香菇对癌细胞有强烈的抑制作用，对小白鼠肉瘤180的抑制率为97.5%，对艾氏癌的抑制率为80%。香菇还含有双链核糖核酸，能诱导产生干扰素，具有抗病 毒能力。 功能主治：不能手术或复发性胃癌、肝癌、膀胱癌，使用本品能缓解症状，提高病人免疫功能，纠正微量元素失调。 香菇含有水溶性鲜味物质，可用作食品调味品，其主要成分是5-乌苷酸等核酸成分。香味成分主要是香菇酸分解生成的香菇精（lentionione）。所以香菇是人们重要的食用、药用菌和调味品。 三、服用注意事项 1、目前尚未有用于早产儿、新生儿和婴幼儿的临床经验，要慎重使用。 2、虽然临床试验仅有很少数病人发生头晕、胸闷、面部潮红等一过性反应，临床仍应注意过敏反应的可能性。 婴幼儿 3、加入溶剂后，要用力振摇，使完全溶解，即刻使用。 4、应根据医生处方和遵照医嘱。 5、本品和维生素C混合，会使溶液变浑浊，应避免混用。 四、实验原理 在组织中，多糖多与蛋白质以共价相结 合，所以在生化产品制备工艺中，往往第 一步多用酶降解蛋白质部分或用碱使多 糖—蛋白质间的键裂开，以促进多糖在提 取时的溶解。碱性提取可避免多糖中硫酸 基团水解而破坏。现多采用碱性提取的同 时用蛋白质水解酶处理组织。提取液中存 在的蛋白质可用普通蛋白质沉淀剂使之沉 淀，也可用其他方法使变性沉淀，如适当 调pH和加热等。 五、实验目的 掌握水溶醇沉法分离多糖类 化合物的原理和方法 六、实验步骤 1、材料：香菇 2、试剂：试剂：活性炭、氯仿、 无水乙醇、丙酮、乙醚、苯酚、 浓硫酸、甘露糖、Sephadex G100凝胶 3、设备和仪器：水浴锅、抽滤装 置、离心机、分光光度计 七、操作步骤 （1）多糖的提取 取香菇10g，于组织捣碎机内粉 碎，加20倍量的水，90℃水浴加热 30min,抽滤，得滤液，加活性炭 （1mg/ml），搅拌吸附1h，抽滤， 得滤液，用氯仿萃取（3次）以除 尽蛋白质，萃余液中加无水乙醇， 使其乙醇最终浓度为80%，沉淀12h 后，于离心机中离心4000r/min 30min，沉淀物分别用无水乙醇， 丙酮，乙醚洗涤3次，即得香菇多 糖提取物。 2）多糖提取 Sephadex G-100凝胶充分溶 胀后装柱，用蒸馏水平衡48h。 取香菇多糖提取物溶于蒸馏水 中，离心去除不溶物，上清液 上柱分离，用蒸馏水洗脱，洗 脱速度5ml/20min，200nm波 长紫外检测，收集主要峰分， 冷冻干燥得白色香菇多糖，称 重。 3）香菇多糖分析检测 定性分析-----苯酚-硫 酸法 苯酚-硫酸试剂：苯酚3g， 浓硫酸5ml，溶于95ml无水乙 醇中，喷后，110 ℃加入几分 钟，糖显棕色 定量分析-----分光光度 法 A制备标准曲线 精密称取60 ℃干燥至恒重的甘 露糖标准品0.1g，置于100ml容量 瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度， 用移液管量取对照品溶液0、0.5、 1.0、2.0、2.5、3.0ml分别置50ml 容量瓶中，加蒸馏水至刻度，在各 精密吸取1ml置于比色管中，准确 移取8%苯酚溶液1ml，快速加入浓 硫酸5ml，置水浴中加热15min，取 出冷却至室温，橘黄色溶液从小到 大逐渐加深，将溶液于490nm波长 的可见分光光度计处测定吸光值， 绘制标准曲线 。 B样品多糖测定 精密称取香菇多糖10.0mg， 加水溶解，定量移入100ml容 量瓶中，加水至刻度，摇匀。 准确吸取2.00ml，按上述实验 方法显色，测定吸光值，计算 香菇多糖含量。 * * *