仪器分析教学,HPLC高效液相.pptVIP

2. 固定相及分离柱 选择短柱、细内径提高分析速度； 研制高效柱填料是一活跃领域。 3.流动相组成 流动相按组成不同可分为单组分和多组分； 按极性可分为极性、弱极性、非极性； 按使用方式有等度洗脱和梯度洗脱。 3.流动相组成 常用溶剂: 己烷、四氯化碳、甲苯、乙酸乙酯、乙醇、 乙腈、水。 采用二元或多元组合溶剂作为流动相可以灵活调节流动相的极性或增加选择性，以改进分离或调整出峰时间。 17.2.2 进样系统 色谱柱 色谱柱是实现分离的核心部件。要求柱效高、柱容量大和性能稳定。柱性能与柱结构、填料特性、填充质量和使用条件有关。 17.2.3 分离系统： 色谱柱 常用内壁抛光过的不锈钢制成 颗粒直径早期大（20~75μm），柱管径一般为2mm，柱长为50~100cm. 近年来，用高效微型填料（3~10μm）管径为4~5mm，长为10cm~50cm的直形不锈钢柱。 每米柱效可达8万塔板数 spherical and irregular silica particles Macroporous spherical silica particle. [K.K.Unger, Porous silica, Elsevier, 1979] 基质：载体或担体。数?m~数十?m，球形。 硅胶或有机高分子聚合物 17.2.3 分离系统： 色谱柱填料 柱性能指标: 柱压 理论塔板高度H 理论塔板数n 对称因子f 容量因子k 选择性因子α 分离度R 17.2.4 检测系统 检测器应具有： 溶质性检测器有：紫外、荧光、电化学检测器等 总体检测器有：示差折光、介电常数检测器等 灵敏度高、噪音低、线性范围宽、响应快，死体积小、定量准确、适应范围广等特点，同时还应该对温度和载液流速的变化不敏感。 17.2.4 紫外-可见检测器 光源 检测室 光栅 二极管阵列检测 UV detector cell 内容积：1-10 ?l 光路长：2-10mm 17.2.4 荧光检测器 特点： 有非常高的灵敏度和良好的选择性，灵敏度要比紫外检测法高2?3个数量级，特别适合于药物和生物化学样品的分析。 17.2.4 荧光检测器 17.2.4 质谱检测器 HPLC-ESI/MS 17.2.4 数据处理 计算机进行峰面积的积分、分析结果的计算、误差的分析或色谱图的输出，记录的信号进行程序化、自动化处理。 复习: 高效液相色谱仪结构 进样器 贮液器 高压泵 色谱柱 馏分 收集器 检测器 记录仪 输液系统 进样系统 分离系统 检测系统 17.2 Main stages of HPLC analysis Prepare Sample inject into column elute with mobile phase detect sample components identify and quantify 17.2 高效液相色谱仪的工作流程 进样器 贮液器 高压泵 梯度 洗脱装置 色谱柱 馏分 收集器 检测器 记录仪 高效液相色谱仪结构示意图 17.2 高效液相色谱仪的工作流程 进样器 贮液器 高压泵 梯度 洗脱装置 色谱柱 馏分 收集器 检测器 记录仪 高效液相色谱仪结构示意图 17.2 高效液相色谱仪的工作流程 进样器 贮液器 高压泵 梯度 洗脱装置 色谱柱 馏分 收集器 检测器 记录仪 高效液相色谱仪结构示意图 17.2 高效液相色谱仪的工作流程 进样器 贮液器 高压泵 梯度 洗脱装置 色谱柱 馏分 收集器 检测器 记录仪 高效液相色谱仪结构示意图 t S 高效液相色谱的应用： 医药卫生、 食品、 人体化学成分、各类合成药物成分、各种天然植物和动物药物化学成分。 17.3 高效液相色谱法的应用 高效液相色谱的应用： 医药卫生、 食品、 环保 等各个领域最为重要的分离分析技术。 17.3 高效液相色谱法的应用 有机酸、氨基酸、糖、维生素、脂肪酸、香料、甜味剂、防腐剂、人工色素、病原微生物、霉菌毒素等。 南京市儿童医院，徐进，儿科药学杂，1999年第5卷第2期色谱条件 色谱条件 : 岛津LC—10A D高效液相色谱仪； RF一l0AxL荧光检测器，荧光激发波长360nm，发射波长430nm; LD一I0A泵，分析柱为Spherisorb ODS 5μm, 200 x 4. 6mm,预柱