维生素B6测定(精).ppt

维生素B6测定 1、适用范围 本标准适用于所添加维生素B6的测定。测定范围为0.08～3.5μg/mL。 2、 原理用水提取，在pH7条件下，用荧光法测定维生素B6。 维生素B6测定 3、 试剂和溶液 3.1 pH7缓冲液称取29.3023g磷酸氢二钠（GB 1263）和3.8115g柠檬酸，于100mL容量瓶中，用煮沸后冷却的水，溶解并定容至刻度。混匀备用。 3.2 维生素B6标准贮备溶液称取40mg（中国药典参照标准）维生素B6，或复合维生素（中国药典参照标准）B640mg， B1100mg，B250mg（精确至0.0001g）于100mL容量瓶中，加水溶解定容至刻度，此液1mL含400μg的维生素B6。 3.3 维生素B6标准工作溶液 吸取（3.2）贮备液1mL于100mL容量瓶中加水稀释至刻度，混匀，此液1mL含4μg的维生素B6。 维生素B6测定 4 仪器设备 4.1 荧光分光光度计； 4.2 分析天平：感量0.0001g。 4.3 实验室用器皿 容量瓶 1000mL，100mL，50mL，25mL。 刻度移液管 10mL，5mL，1mL。 维生素B6测定 5 、分析步骤 5.1 试样的选取和制备 选取有代表性的试样，粉碎通过0.28mm孔筛，用四分法缩减至100g，密封保存，以防试样维生素B6变化或变质。 5.2 测定步骤 5.2.1 维生素B6的提取 称取试样0.5～2g，（精确至0.0001g）于100mL容量瓶中，加水溶解后，定容至刻度，振荡1～2min，静置待沉清，或离心（400r/min）10min。 维生素B6测定 5.2.2 试样的测定 移取试样的上清液1mL（≤40μgVB6）于25mL容量瓶中，加入（3.1）pH7缓冲液至刻度，混匀，用1cm石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长326nm、发射波长395nm测定其荧光强度。 同时做空白试验。 维生素B6测定 5.2.3 工作曲线的绘制 取0.00，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50mL维生素B6标准工作液（3.3）分别于25mL容量瓶中，加入pH7缓冲液（3.1）至刻度，混匀，用1cm石英比色杯，置入荧光分光光度计内，于激发波长326nm、发射波长395nm测定其荧光强度，以荧光强度为纵坐标，维生素B6量为横坐标，绘制工作曲线。 维生素B6测定 6 分析结果计算和表述 维生素B6的含量（mg/kg）按下式计算： VB6（mg/kg）＝M×D/W×（1000/1000）＝M×D/W 式中：M──工作曲线上查得维生素B6含量，μg/mL； W──试样的质量，g； D──试样的总体积，mL。 维生素B6测定 7 、允许差 7.1 每个试样称取两份平行测定，取算术平均值为测定结果并保留两位小数。 7.2 维生素B6含量少于40mg/kg以下，平行测定结果相对差值不大于10％，维生素B6含量大于40mg/kg的平行测定结果相对差值不大于5％。/P p 维生素B2测定 1、适用范围 本标准规定了饲料中维生素B2测定方法。 本标准适用于维生素B2的测定。待测液中维生素 B2检测浓度为0.05～0.2μg/mL。 维生素B2测定 2、方法原理 维生素B2（即核黄素C17H20N1O6）在440nm紫外光激发下产生绿色荧光，在一定浓度范围内 其荧光强度与核黄素浓度成正比。用连二亚硫酸钠还原核黄素成无荧光物质，由还原前后荧光 强度之差与内标荧光强度的比值，计算样品核黄素的含量。 维生素B2测定 3、试剂和溶液 3.1 盐酸溶液，0.1mol/L：将8.5mL盐酸（GB 622）用水稀释至1000mL。 3.2 盐酸溶液，1mol/L。 3.3 氢氧化钠（GB 629）溶液，1mol/L。 3.4 冰乙酸（GB 676）。 3.5 冰乙酸溶液，0.02mol/L：将1.8mL冰乙酸用水稀释至1000mL。 3.6 高锰酸钾（GB 643）溶液，40g/L。 3.7 过氧化氢（HG 3─1082）溶液，100mL/L。现用现配。 维生素B2测定 3.8 核酸素标准溶液 3.8.1 核黄素贮备液Ⅰ：核黄素（中国药典参照标准），于五氧化二磷干燥器中干燥24h，称取0.0500g，溶解于0.02mol/L乙酸溶液（4.5）中，在蒸汽浴上恒速搅动直至溶解，冷却后稀释至500mL。盛入棕色瓶滴加甲苯覆盖，低温（4℃）保存。 该溶液每毫升含0.1mg核黄素。 3.8.2 核黄素贮备液Ⅱ：取核黄素贮备液Ⅰ（4.8.1）10mL用0.02mol/L乙酸溶液稀释至100mL，盛于棕色瓶中滴加甲苯覆盖，低温（4℃）保存。 该溶液每毫升中含10μg核黄素。 3.8.3 核黄素标准工作液：取核黄素贮备液