从肾小球基底膜断裂的病理环节发掘HSPN新月体形成早期….pptVIP

从肾小球基底膜断裂的病理环节发掘肾脏新月体形成早期的尿生物标志物 黄岩杰1，张书胜2，杨晓青1 ，毕亮亮1 ，邓志芬2 ，王贝2 ，吕晶晶1 ，李静1 ，梅晓峰1 ，李金刚1 1.河南中医学院第一附属医院儿科实验室 2.郑州大学化学与分子工程学院 汇报提纲 研究背景 研究假设 研究计划 拟解决的关键科学问题 可行性分析 * 2015 urimarker 北京 新月体 新月体属病理形态学概念，是指各种原因导致肾小球毛细血管壁严重损伤和断裂，肾小球鲍曼囊被毛细血管漏出的血细胞、纤维素以及浸润的单核细胞、增生的上皮细胞填充，在毛细血管球外侧形成的半球状结构（如图2和图3所示），形成的新月体压迫肾小球、导致缺血坏死，最后肾小球硬化废弃，造成患者肾功能受损。 图 1 正常肾小球 图 2 细胞性新月体 图 3 新月体 模式图 研究背景 1.新月体形成的性状和百分比是决定多种肾小球疾病病情轻重、确定治疗方案和判断预后的重要病理因素。 研究背景 2.新月体形成的性状和百分比也是决定紫癜性肾炎病情轻重、确定治疗方案和判断预后的重要病理因素。 紫癜性肾炎（Henoch-Schonlein purpura nephritis, HSPN）是过敏性紫癜（Henoch-Schonlein purpura, HSP）最严重的并发症，也是影响HSP预后的决定因素之一。占小儿继发性肾小球疾病的首位。 国际儿童肾脏病学会将HSPN病理分为Ⅰ-Ⅵ级,其中Ⅲ-Ⅴ级的分级主要是依据肾小球系膜细胞增生程度和新月体形成的百分比： Ⅲ型: 新月体50% Ⅳ型: 新月体50%-75% Ⅴ型: 新月体75% IV-Ⅴ级临床表现重、病情进展快、肾衰发生比例高。 中华医学会儿科学分会肾脏病学组也是依据HSPN临床表现和病理分级，尤其是新月体比例，制订了诊疗指南。 研究背景 3.发掘简便易行、非创伤性的肾脏新月体形成早期的尿生物标志物是目前亟待解决的关键科学问题。 目前，新月体病变的发现依赖于肾活检。尿液是探索肾脏疾病无创性标志物的良好来源，深入解读尿液中包含的信息，能客观、及时地反映肾脏局部的特定病理变化。 关于尿中新月体形成的标志物的研究，Iwano等用ELISA方法检测到尿中纤维母细胞特异性蛋白-1（FSP-1)可以作为新月体形成的生物标记物。FSP-1作为上皮-间叶细胞转分化（epithelial mesenchymal transition，EMT）的标记难以早期预测新月体的形成， 目前，临床上仍缺乏预示早期新月体形成的尿生物标志物。 研究背景 4. GBM的严重损伤和断裂是不同病因下新月体形成的共同病理事件。 图4. 总结多条途径参与新月体形成早期肾小球毛细血管腔内的病理损伤 HSPN新月体的形成与下列一系列事件有关：① IgA循环免疫复合物在内皮下和系膜区沉积。② 局部补体的激活。③ 系膜和内皮细胞产生的IL-8诱导嗜中性粒细胞的浸润。④ 刺激内皮细胞表达von willebrand factor和组织因子，启动凝血级联，导致了肾小球纤维蛋白的沉积。⑤ 基底膜的破坏。⑥ 在包曼囊内巨噬细胞浸润和细胞因子诱导上皮细胞增生。⑦ 包曼囊完整性的破坏和间质纤维母细胞进入包曼囊，导致了纤维化的形成。⑧ 肾小球和骨髓起源细胞的遗传学差异，影响了新月体产生的个体易感性。 本次研究我们将聚焦新月体形成早期GBM破坏的病理事件，在尿中寻找参与这一病理事件的生物标志物，目前在国内外文献报道中尚未见同类研究。 研究背景 5. 酶可能是GBM受损的主要攻击物，而某些重要的炎症因子和高凝状态参与了酶的激活。因此导致GBM的断裂和新月体的形成。 肾小球毛细血管壁的组成成分包括内皮细胞、GBM和足细胞足突。其中，GBM由Ⅳ型胶原、层粘连蛋白、纤维连接蛋白和硫酸肝素蛋白多糖组成。不像内皮细胞和足细胞，GBM的组成主要是基质、胶原蛋白成分，因此，GBM损伤的主要攻击者是酶。 图5 肾小球毛细血管壁的组成 肾小球基底膜 研究背景 基质金属蛋白酶（Matrix metalloproteinases, MMPs) 参与了细胞外基质的降解，其中MMP-2、MMP-9属明胶酶，可降解GBM的组分，尤其MMP-9是降解GBM中IV型胶原的主要酶类物质。 课题组前期研究： 我们检测到MMP-9在HSPN肾小球炎性增生的毛细血管袢区、GBM断裂处和新月体形成细胞内大量表达(图6)； 图6 MMP-9在HSPN肾小球内的表达 课题组前期研究： 我们同时检测了临床和病理诊断为HSPN的患儿尿中MMP9、Ⅳ型胶原含量，发现HSPN新月体形成患儿尿中MMP9 (图7) 、Ⅳ型胶原含量明显高于无新月体形成