牛奶对小鼠抗胰岛细胞抗体（ICA）的影响.ppt

牛奶对小鼠抗胰岛细胞抗体（ICA）的影响 实验设计 问题 背景 预期实验结果 讨论 目录 * 1型糖尿病，原名胰岛素依赖型糖尿病——是严重威胁青壮年和少年儿童健康的重要疾病。 与更常见的2型糖尿病相比,典型1型糖尿病的 特 点 包 括 发 病 年 龄 较 轻 ，起 病 迅 速 ，“三多一少”等症状明显，常有自发酮症倾向，胰岛素分泌显著下降甚至缺失，需终身胰岛素治疗维持生命。该病患者的血糖控制往往较差，对青少年儿童生长发育、育龄妇女妊娠有不利影响，严重时甚至危及生命。1 眼 脑 心血管 肾 背景 * 确认免疫介导1型糖尿病，主要依赖在糖尿病患者中检出针对胰岛β细胞各种抗原的自身免疫抗体。 抗胰岛细胞抗体（Islet cell autoantibodies, ICA）属器官特异型抗体，主要为lgG类，抗原为胰岛细胞浆成分或微粒体组分，是胰岛β细胞损伤的标志。对1型糖尿病的诊断具有一定价值。2-3 ICA见于初诊断的1型糖尿病患者，总阳性率31.2%，在起病的头两周内可高达85%，数周后降至50%；而在非胰岛素依赖性糖尿病和“化学性”糖尿病人，阳性率仅为6.2%和4.9%，故可作胰岛素依赖性和非依赖性糖尿病的鉴别诊断依据。4 背景 * 许多研究提示牛奶(含牛血清白蛋白Bovine Serum Albumin, BSA等）可能是引起1型糖尿病的重要饮食因素，1型糖尿病易感者的发病和在婴儿期进食牛奶有关。对于1型糖尿病的动物模型BB大鼠和NOD小鼠，在断奶初期给与牛奶或BSA，可使糖尿病的发病率明显提高。在1型糖尿病患者血清中可以检测出BSA及其他牛奶蛋白抗体。5 Karges等用牛奶蛋白被水解后所得的饲料(称为Nutramigen)喂养NOD小鼠10周以上，到第32周，1型糖尿病发生率明显低于对照组(4.6% vs. 58.8%)。未患糖尿病的小鼠胰岛素储备功能良好，胰岛无炎症反应。6 背景 * 确认免疫介导1型糖尿病，主要依赖在糖尿病患者中检出针对胰岛β细胞各种抗原的自身免疫抗体。 抗胰岛细胞抗体（Islet cell autoantibodies, ICA）属器官特异型抗体，主要为lgG类，抗原为胰岛细胞浆成分或微粒体组分，是胰岛β细胞损伤的标志。对1型糖尿病的诊断具有一定价值。2-3 ICA见于初诊断的1型糖尿病患者，总阳性率31.2%，在起病的头两周内可高达85%，数周后降至50%；而在非胰岛素依赖性糖尿病和“化学性”糖尿病人，阳性率仅为6.2%和4.9%，故可作胰岛素依赖性和非依赖性糖尿病的鉴别诊断依据。4 背景 * 本实验将通过间接免疫法，检测小鼠血清中ICA，估测血清中ICA的含量。探讨饮用牛奶对小鼠胰岛β细胞各种抗原的自身免疫抗体产生的影响。 原创点： 探究牛奶对小鼠ICA产生有无影响。 问题 * 实验方法： 间接免疫荧光法及ELISA法 观察指标： 间接免疫荧光法：荧光显微镜下所观察到的荧光图像，主要以两个指标判断结果，一是形态学特征，二是荧光强度。 ELISA法：酶标仪测得的OD值。 实验设计 * 实验对象： 清洁级ICR小鼠，雌雄各半，20-25g，60只 （由浙江大学实验中心提供） 实验仪器： 小鼠胰岛细胞抗体（ICA）检测试剂盒（上海研生实业有限公司） 酶标仪 荧光显微镜 离心机 水浴锅 37℃温箱等。 实验设计 * 实验材料试剂： 待测标本：各组小鼠眼球血标本，小鼠血清 大白鼠胰腺切片 荧光素标记的ICA抗抗体 pH7.4 0.01mol/L 磷酸盐缓冲盐水（Phosphate Buffered Saline, PBS） 低聚果糖 菊粉 富硒酵母 实验设计 * 1、成分牛奶制备 根据普通成人每日饮用500mL（按60kg体重计）牛奶计算，由于样品量超出动物最大承受量，需要将样品浓缩。故将成分牛奶配方设计为：称取低聚果糖120g、菊粉50g和富硒酵母1.5mg加入100mL牛奶中，水浴锅中预热到80℃，经过高速剪切混匀、均制、杀菌后作为成分牛奶供试液，即将功效成分增加100倍，相当于人体推荐量每日5mL/60kg。 实验设计-步骤 * 2、小鼠分组 根据本试验剂量设计要求及成分牛奶供试液的推荐剂量，设定低、中、高3个剂量组为每日 0.4mL/kg·