22q11微缺失和微重复综合征.ppt

* * * * 为什么这些临床表现各异的综合征有共同的缺失或重复区域？ 产生这一现象的遗传学机制？ 22q11的基因组结构？ * Part 3 LCR22与染色体重排 * LCR简介 低拷贝重复序列(low copy repeats，LCR)分散地位于染色体内，其序列总长占人类基因组的近5% 单个LCR的 大小介于10-240kb之间 不同位点的LCR95%以上的序列具有相似性 目前认为LCR在减数分裂期间可以导致相邻DNA片段发生不对称的同源重组，结果导致染色体的微缺失、微重复、插入、转位等。 LCR22及其介导的染色体重排 * 22号染色体上的LCR----LCR22s 目前在22q11.2上共发现8个LCR，分别为LCR2、LCR3a、LCR3b、LCR4-8，其总长合计为720kb，占该区间（6Mb）的11.63%。最大的两个LCR为LCR22-2和 LCR22-4，均为240kb左右，其余LCR大小介于1-90kb之间，详见下表。 LCR22及其介导的染色体重排 * 22号染色体上的LCR----LCR22s LCR22及其介导的染色体重排 * LCR22s的内部结构 LCR由基因和假基因构成 参与构成LCR22s的基因和假基因如下 V7-REL GGT-REL GGTLA BCRL POM121L LCR22及其介导的染色体重排 * LCR22s的内部结构 图示DGCR区的LCR22s及其与22q11DS（VCFS）缺失区域的关系 LCR22及其介导的染色体重排 * LCR22s介导的染色体重排 （A）一条正常的染色体和一条发生3Mb微缺失的染色体 （B）一条3Mb微缺失染色体和一条3Mb微重复的染色体 （C）一条正常的染色体和一条发生1.5Mb微缺失的染色体 （D）一条1.5Mb微缺失染色体和一条1.5Mb微重复的染色体 LCR22及其介导的染色体重排 T.Maynard et al., 2002 * 缺失或重复 * CES双着丝粒染色体形成的可能机制 * 易位 * Part 4 相关检测方法 * 1传统细胞遗传学分析 传统细胞遗传学方法即G显带法 由于缺失或重复的片段较小，接近其检测的下限值3Mb，故此法的应用受到限制，只能检出 大于上述缺失的片段 额外的双着丝粒染色体（猫眼综合征） 一些大片段的染色体易位 总体而言检出率只有20%左右 操作简单，费用低廉，各实验室均有条件进行 可以同时观察其他染色体有无异常 临床上常用作筛查的手段 * DGS患者的核型图 * 2 FISH分析 原理：荧光原位杂交，即使用特异性的荧光标记的探针与染色体相应序列相结合，并在荧光灯下照射发光，从而得知相对应的序列是否发生了缺失或重复 高敏感性、高特异性使其成为检测22q11缺失或重复的事实上的金标准，其他方法获得的结果均须得到FISH的证实 耗时长（8天左右）、价格昂贵（250美元/次？）、要求有专用仪器、操作相对复杂、工作量大，限制了其在临床的广泛应用 由于DNA探针的高度特异性，一种探针只能检测一个位点，对于该探针位点以外的缺失可能存在漏诊。 * 用FISH检测22q11区缺失：箭头所指22号染色体发现缺失 * 用FISH检测22q11区缺失：绿色为对照探针，红色为DiGeorge 探针 * 用FISH检测到22q11区重复 SJ Hassed,et al.Clin Genet 2004: 65: 400–404 * 3.1多重PCR 主要是利用缺失重复区的多个微卫星标记、短串联重复序列等进行扩增。 该法不需培养细胞，省时省力，检测成本低 必须有父母的DNA样品作对照，而且由于纯合子基因型的存在，对扩增产物为单一条带者不能明确判别是否缺失 当所取的几个标记或位点不能得出有效结果时，需要选取其他位点，此时工作量和成本均增加。 * 3.2实时荧光定量PCR 原理：在PCR过程中实时采集荧光信号，可在较高精度水平定量检测产物 整个检测过程在24小时内可以完成，操作简单，方便快捷，成本相对低廉 不需要父母的DNA样品作对照，结果比较可靠，其与FISH的相符率达到99.7% 不能检测出染色体嵌合现象和平衡易位 所需的实验仪器价格昂贵 * 3.3 MPLA 使用试剂盒在一次反应中扩增多至50个的靶序列，并对其做半定量测定 快速，敏感，可靠，价格便宜，每个反应只需~￡16.50(？) $14(？) 对设备要求不高，热循环仪和测序电泳仪即可 操作方便，出结果快，24小时内 缺点是有假阳性，某些点突变可能阻碍探针结合，被误认为缺失。 * DiGeorge/VCFS 探针试剂盒 由M