茶多酚及其氧化产物清除不同体系产生的活性氧自由基的分光光度法研究.docVIP

第17 卷第4期 2 0 0 0 年4 月 精细化工 FINE CHEMICALS Vol. 17, No. 4 Apr. 2 0 0 0 生物工程 茶多酚及其氧化产物清除不同体系产生的 活性氧自由基的分光光度法研究.. 李春美, 谢笔钧 ( 华中农业大学食品科技系, 湖北武汉.. 430070) 摘要: 用分光光度法测定了茶多酚及其氧化产物对不同体系产生的活性氧自由基O2 ..- 和..OH 的清除作用。结果表明: 对由光照核黄素体系产生的O2 ..- , 在试验质量浓度范围( 8..3~ 167 ug.. mL) 内茶多酚及其氧化产物的最大清除率分别为96..6% 和92..1%。对由2..脱氧..D..核糖体系产 生的..OH, 在实验质量浓度范围( 5~ 800 ug..mL) 内茶多酚及其氧化产物的最大清除率分别为 83..4%和88.. 5%。茶多酚氧化产物, SOD 粗酶液, 茶多酚对邻苯三酚自氧化产生的O2 ..- 均表现 出较强的抑制作用, 抑制率分别为66..5%, 47..6%, 45..3%。茶多酚及其氧化产物与SOD 有显著 的协同增效作用, 但氧化产物的效果强于茶多酚。 关键词: 茶多酚; 氧化产物; 活性氧自由基; 分光光度法 中图分类号: Q503 .. .. 文献标识码: A.. .. 文章编号: 1003- 5214( 2000) 04- 0241- 04 .. .. 活性氧自由基能引起脂质过氧化作用, 引起组织 损伤、细胞功能衰退或丧失, 因而导致人体许多疾 病[1] 。活性氧在人体内有三种存在形式: O2 ..- 、..OH 及H2O2 , 它们是人体新陈代谢的副产物, 能损坏生物 分子, 导致细胞或组织损坏, 并在化学致癌物的致癌 过程中起着不可忽视的作用。抗自由基物质能拮抗 体内过量的自由基。避免组织的氧化损伤, 从而预防 相关疾病的发生, 维护人体健康。寻找外源性的自由 基清除剂和抗氧化剂已越来越引起人们的重视。大 量研究表明, 茶叶中的多酚类化合物具有较强的清除 体内自由基作用及抗氧化作用。台湾国际Cheng Hsing 大学的YEN Gow..chin, CHEN Hui..yin 等[ 2] 研究 发现, 半发酵茶的抗氧化活性大于不发酵茶和发酵 茶。谢笔钧、胡慰望教授[ 3] 研究发现, 茶黄素单酯..2B (TFM..2B) 和茶黄素双酯(TFD) 比表没食子儿茶素没 食子酸酯( EGCG) 抑制脂肪氧化酶的作用更强。湖南 医科大学的曹进报道[ 4] 茶色素具有比儿茶素单体更 优异的抑菌和抗菌毒活性。浙江医科大学心血管专 家楼福庆教授研究表明, 茶色素对高血脂症、血液高 粘滞具有很好的预防和治疗作用[5] 。这表明茶多酚 的氧化产物可能比茶多酚具有更优异的生物活性。 作者通过一定方法制得儿茶素氧化物, 并采用分光光 度法测定其在不同体系中清除O2 ..- 和..OH 的作用并 与茶多酚和SOD 酶相比较, 以探讨其生物活性。 .. 实验 1 .. 材料 茶多酚, 四川筠莲茶多酚厂生产; 儿茶素氧化产 物的制备: 取一定量 的高质量分数茶多酚[ w ( EGCG) gt; 85%] 水溶液, 加入一定量氧化剂, 置磁力 搅拌器上于45 下中速搅拌5 h 后终止反应, 冷冻 干燥即可。 SOD 粗酶液: 由华中农业大学食品科技系食品 微生物学研究室提供, 系从所培养的食用菌菌丝体 中提取而得。 2 .. 实验方法 2. 1 .. 光照核黄素体系产生O2 ..- 参照Beaucharp 法[ 6] 。用pH 值为7..8 的0..05 mol..L 混合磷酸盐缓冲液为溶剂, 配制含3..3 ! 10- 6 mol..L 核黄素, 0..01 mol..L 蛋氨酸, 4. 6 ! 10- 5 mol..L 氯化硝基四氮唑兰(NBT) 及各种浓度的儿茶素氧化 产物, 在25 下, 4000 lx 照度下光照30 min, 于 .. 收稿日期: 1999- 09- 19  560 nm处测定溶液的吸光度。 2. 2 .. 2..脱氧..D..核糖( DR) 法产生..OH 依参考文献[ 7] 进行。在洁净干燥的试管中依 次加入0..4 mL 50 mmol..L pH 值为7..5 的KH2PO4 - KOH 缓冲液, 一定浓度的样品, 0..1 mL 1..04 mmol..L 的EDTA 溶液, 0..1 mL 10 mmol..L H2O2 溶液, 0..1 mL 60 mmol..L DR 溶液( 对照不加) , 0..1 mL 2mmol..L Vc, 保证各管最终体积为1 mL, 于37 下保温1 h 后取 出加入1 mL w ( HCl) = 25% 水溶液终止反应,