镉对小鼠肝脏毒性作用的实验观察.docVIP

镉对小鼠肝脏毒性作用的实验观察（综合设计实验） 镉对小鼠肝脏毒性作用的实验观察 ? 一、????????????实验研究依据实验目的与意义 肝脏是镉急性中毒损伤的主要靶器官之一 。鼠急性中毒后，镉主要蓄积于肝脏。有文献报道，镉有很强的亲硫性。在肝脏中，镉易与巯基结合从而诱导金属硫蛋白生成镉一硫蛋白【1】，因而金属硫蛋白对急性镉中毒有应急保护作用【2】，但若镉在短期内大量转运到肝脏，便导致肝内金属硫蛋白相对不足，不能与镉有效结合而引起肝功能障碍，这可能是镉引起血清AST、ALT活性及MDA升高的原因之一。【3】 有研究发现，染镉后，从外观上看，小鼠肝脏体积肿大，肝叶肿胀明显，肝叶间有粘连、边缘变钝，颜色紫黑，质地变硬。【3】镜下肝实质细胞的肿胀、嗜酸性变、淋巴细胞浸润及核固缩等肝细胞损伤改变。 ????????本研究通过动物实验，了解镉对小鼠肝脏的毒性作用，并从氧化应激方面探讨其作用机制。 二、????????????实验内容与方法 (1)、实验动物：健康成年清洁级昆明种小鼠40只，雌雄各半。 (2)、主要试剂与仪器： l??仪器：7230分光光度计；显徽镜；分析天平；SIGMA 2K15型冷冻高速离心机； l??试剂：氯化镉?(CdCI2，A．R．)、HNO3-HClO4、蒸馏水、生理盐水 (3)、动物分组与染毒：体重?18—25g的健康成年清洁级昆明种小鼠随机区组分 为4组，每组10只，雌雄各办临用前以生理盐水配制CdCI2溶液，CdCI2染毒剂量分别为0.5、?1.0、?2.0mg/kg，染毒组小鼠皮下注射氯化镉溶液(10ml／kg体重)，对照组注射生理盐水?(10ml／kg体重)，连续染毒三天。各组小鼠最后一次染毒24小时后摘眼球采血或断头取全血，4°下用3000r/min离心10分钟制备血清。小鼠处死后迅速摘出肝脏，生理盐水洗净、吸干、称重。血清用于AST、ALT生化指标测定，取部分肝脏用于SOD、MDA测定。 ? 三、????????????观察指标 1．?????????????AST、ALT活性的测定：AST、ALT检测试剂盒，比色法。 2．????????????MDA测定采用：硫代巴比妥酸(TBA)法．以?1,1,3,3—四乙氧基丙烷?(TEP)为标准，单位以每克蛋白中与TBA反应物(TBARS)的μmol数表示。蛋白质测定采用Lowry法，以小牛血清白蛋白为标准；MDA检测试剂盒，比色法。 3．????????????SOD测定：SOD检测试剂盒，比色法。 4．????????????肝重、体重、脏器系数：称重法。 5．????????????肝匀浆蛋白质测定：考马氏亮蓝比色法 ? 四、????????????数据统计处理方法 ???????各组检测指标计算均数、标准差，数据各组间比较采用F检验。 五、????????????预期实验结果 1、随着CdCI2浓度的增长，AST、ALT的活性升高，提示镉对肝脏组织的损伤作用。 2、MDA测定的反应物TBARS与CdCI2的染毒浓度呈正 相关，且有效应剂量关系。 ? 文献资料： 【1】?????刘杰.用转基因动物研究金属硫蛋白对镉毒性的左右[J].中华劳动卫生职业病杂志，1998,16(1):43. 【2】????金慧英.急性镉中毒的肝脏损伤机制及金属硫蛋白的保护作用[J].中华劳动卫生职业病杂志,1998,16(1):43. 【3】????陈敏，等.镉对小鼠肝脏的毒作用机理探讨[J].江苏大学学报?(医学版)，August 2002,12(4). 【4】????Xie JM,Funakoshi T,Shimada H,et al.Comparative effects of chelating agents in pulmonary toxicity of systemic nickel in mice[J].J Appl Toxicol,1996,16:317. 【5】????谢吉民，胡继岳，朱卫华.等.新型螯合剂对镍致小鼠肝脏毒性的影响[J].中华劳动卫生职业病杂志.1997.15(6):325. 【6】????谢吉民，胡继岳，朱卫华.等.几种二六代氨基甲酸盐解镍致小鼠肝肾毒性作用比较[J].江苏医药.1998.24(增刊):521. 【7】???? 李宏, 张文昌, 汪家梨, 黄凌群.?镉的雌激素样作用及相关机制体内的实验.?[J]毒理学杂志.2005.19(3):231.