第八章 免疫学技术在食品科学中的应用.pptVIP

颗粒状抗原：如细菌、红细胞等。 不溶性载体：如，乳胶颗粒、红细胞 颗粒状抗原：如细菌、红细胞等。 不溶性载体：如，乳胶颗粒、红细胞 颗粒状抗原：如细菌、红细胞等。 不溶性载体：如，乳胶颗粒、红细胞 在一定条件下，沉淀环的大小与抗原浓度呈正相关。用不同浓度的标准抗原制成标准曲线，则未知标本中的抗原含量可从标准曲线中查出。 酶和抗原或抗体连接方法：交联剂戊二醛法和过碘酸氧化法。 1、2可溶性抗原或抗体 3用于测定组织或细胞表面的抗原。 如;牛乳、蜂蜜、动物内脏中庆大霉素、卡那霉素、新霉素等抗生素。 食品中农药残留检测等。现在有许多商业化的免疫检测试剂盒。 PCR-ELISA 免疫核酸探针技术 重组免疫结合试验 免疫生物传感器 免疫胶体金技术 斑点酶联免疫吸附检测 ELISA广泛应用于食品科学领域。 食品中农药残留检测 食品中抗生素残留检测 食源性病原菌检测 食品安全检测 食品成分提取 功能性食品研究 免疫印迹技术(Immuno-blotting) 将凝胶电泳的高分辨力同固相免疫测定结 合起来的一种方法。先将复合物在分离胶中分 离，然后将这些分子转移至膜上，再用特异性 的抗体来鉴定这些单个的抗原成分。 免疫印迹技术(Immuno-blotting) SDS蛋白质转印 酶免疫测定 可应用于蛋白质提取及分析等许多方面。 三项技术结合而成。 免疫印迹技术(Immuno-blotting) CBB Immunoblotting LWPC LWPC 酶免疫组化技术 以酶标抗体与组织或细胞的抗原进行反 应，结合形态学检查，对抗原进行定性、 定量或定位检测的技术。 用于测定组织或细胞表面的抗原。 3.免疫标记技术 酶标记免疫学分析EIA 放射线标记免疫学分析RIA 免疫荧光法IF 放射线标记免疫学分析RIA 用放射性同位素标记抗原或抗体进行免疫 学检测的免疫标记技术。该法灵敏度高达pg。 常用的放射性同位素有125I 和 131I。 应用于食品安全检测，食品中农药残留、 激素等检测。 免疫荧光法IF 直接法—荧光素直接标记抗体，对标本进行检测。 特异性强，但任一抗原均需制备荧光素抗体 间接法—用第一抗体与标本中抗原结合，再用荧光素 标记的二抗进行检测。灵敏度高、荧光素标记的二抗 可用于多种抗原的检测，但非特异性荧光增多。 第二节 淋巴细胞的测定 测定淋巴细胞的功能，可以判断机体的细 胞免疫或体液免疫水平。 测定淋巴细胞功能试验应用于功能性食品 等研究中。 T淋巴细胞增殖试验 T细胞功能测定 细胞毒试验 T淋巴细胞增殖试验 T淋巴细胞在有丝分裂原或抗原刺激下可转化 为淋巴母细胞，产生一系列形态变化。细胞变 大、细胞浆增多、出现空泡、核仁明显、核染色 质疏松等。 T淋巴细胞增殖试验 形态学方法--镜检淋巴母细胞 3H-TdR掺入法—氚标记胸腺嘧啶核苷（Thymidine ribosode)渗入法。测定DNA增殖的量(也可用于测NK细胞活性) MTT比色法—细胞活化增殖水平（可溶性噻唑盐，代谢后产生兰紫色物） T淋巴细胞增殖试验 T淋巴细胞增殖试验 根据形态结构，计算淋巴细胞转 化率，即淋巴母细胞的含量 形态学方法 淋巴细胞转化过程中，细胞DNA合成大 量增多。在细胞培养液中加入氚标记的胸 腺嘧啶核苷（ 3H-TdR ），使3H-TdR渗 入到DNA中，根据细胞内核素的量可判断 淋巴细胞转化程度。 3H-TdR掺入法 MTT比色法 MTT是一种黄色可溶性噻唑盐，掺入细 胞后，在细胞活化增殖时通过线粒体能量 代谢过程，MTT代谢形成蓝紫色甲瓒沉积 于细胞内或细胞周围，形成的甲瓒的量与 细胞活化增殖的程度成正相关。 细胞毒试验 细胞毒试验 乳酸脱氢酶法 细胞凋亡检查法 乳酸脱氢酶法—LDH在胞浆内含量丰 富，正常时不能通过细胞膜，当细胞受 损伤或死亡时可释放到细胞外，此时细 胞培养液中LDH活性与细胞死亡的数目 成正比，用比色法测定。 乳酸脱氢酶法 细胞凋亡检查法—靶细胞被CTL 杀伤后，可发生细胞凋亡。方法有形 态学法、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞 仪等。 细胞凋亡检查法 B细胞功能测定 B细胞的数目和功能测定是反应机体体液 免疫水平的重要指标。 抗体形成细胞试验 用绵羊红细胞（SRBC）免疫家兔或小鼠，取 家兔淋巴结或小鼠脾脏制成细胞悬液，与高浓度 的SRBC混合后加入琼脂糖凝胶中，其中每个释 放溶血性抗体的细胞可致敏其周围的SRBC ，在 补体参与下，抗体形成细胞周围SRBC溶解，在 其周围形成一个肉眼可见的空斑。一个空斑代表 一个抗体形成细胞，空斑