流式分析技术.pptx

流式细胞仪分析技术及应用;第一节 概述 一、工作原理 二、散射光的测定 三、荧光测量 四、细胞分选原理;第四节 流式细胞术在免疫学检查中的应用 一、淋巴细胞及其亚群的分析 二、淋巴细胞功能分析 三、淋巴造血系统分化抗原及白血病免疫分型 四、肿瘤耐药相关蛋白分析 五、AIDS病检测中的应用 六、自身免疫性疾病相关HLA抗原分析 七、移植免疫中的应用; 流式细胞术(flow cytometry, FCM)是以流式细胞仪为检测手段的一项能快速、精确的对单个细胞理化特性进行多参数定量分析和分选的新技术。 ; 流式细胞术最大的特点是能在保持细胞及细胞器或微粒的结构及功能不被破坏的状态下，通过荧光探针的协助，从分子水平上获取多种信号对细胞进行定量分析或纯化分选。 ;;;;采用激光作为激发光源，保证其具有更好的单色性与激发效率； 利用荧光染料与单克隆抗体技术结合的标记技术，保证检测的灵敏度和特异性； 用计算机系统对流动的单细胞悬液中单个细胞的多个参数信号进行数据处理分析，保证了检测速度与统计分析精确性。 ; （1） 液流系统 （2） 光学系统 （3） 数据处理系统;;;FCM的液流系统（如何形成单个细胞流）;;;;基本工作原理;单细胞液柱;; 细胞在液柱中与激光束相交时向周围360°立体角方向散射的光线信号，它的强弱与细胞的大小、形状、胞内颗粒折射等有关，主要分为前向散射光和侧向散射光。;;;;;;;;荧光染料的特性;;; 通过流式细胞仪进行细胞分选主要是在对具有某种特征的细胞需进一步培养和研究时进行的。;细胞悬液形成液流柱;;;;;;单参数直方图;;1.双参数直方图点图;双参数直方图点图;2. 二维等高图;二维等高图;3. 假三维等高图;（三）三参数直方图;;;A 淋巴细胞 B 单核细胞 C 中性粒细胞;线性门;;D1 CD4+/CD3- D2 CD4+/CD3+ D3 CD4- /CD3- D4 CD4- /CD3+;;;;;;名称;;;;;;;通过对标记不同荧光素分子的检测，实现FCM对可溶性物质的定量分析;;温度 pH 染料浓度 固定剂 ;;; 流式细胞术目前已广泛地被应用于免疫学基础研究和逐步进入临床应用各方面，用流式细胞仪对细胞表面的抗原成分进行标记分析，可区别多种细胞的特性，为细胞免疫的研究增加了有效的手段和帮助。 ;;;;;;思考题;小 结