抗-HBs的纯化及在乙肝病毒表面抗原检测中的应用论文.docxVIP

抗的纯化及在乙肝病毒表面抗原检测中的应用 摘要: 本文用硫酸铵饱和沉淀法纯化抗，建立起一种系统的检测乙肝病毒表面抗原的双抗体夹心法，从而使得乙肝病毒表面抗原的检测快速简便准确。我们通过对不同浓度抗体的包被，用已知表面抗原阳性血清进行检测，确定抗原抗体反应的最佳包被抗体稀释度是；然后以此稀释度包被抗体，检测份待检血清，结果发现有份为表面抗原阳性，余者呈表面抗原阴性，与标准对照板的检测结果一致。另外还对双抗体夹心酶联免疫吸附法检测过的份待测血清又进行了尝试性的混合样本分析法检测。本研究建立的抗纯化方案及 检测体系在临床医学免疫诊断中具有一定可操作性和实际应用价值。 关键词: 乙型肝炎表面抗原 硫酸铵饱和沉淀法 抗 酶联免疫吸附试验 双抗体夹心法　 混合样本分析法 : , () . , ，， . () , , , , , . , . . . : , , , , , 第一章 前言 乙型肝炎病毒的生物学特征 年外国学者在血友病患者血清中发现有一种抗体，与澳大利亚土著人血清中的一种抗原起交叉反应，这种抗原当时被称为“澳大利亚抗原”[, ]。年，这种抗原被证实就是乙肝病毒的表面抗原。年，用电子显微镜在乙肝患者血清中观察到了完整的乙肝病毒颗粒(即颗粒)以及乙肝病毒表面抗原颗粒。 乙肝病毒属于嗜肝病毒科中哺乳动物病毒。完整的颗粒直径为 ，分为包直径 ，其本身无传染性，核心部分含有球状双股、聚合酶()、核心抗原()和抗原(),是病毒复制的主体。 应用免疫学实验，按表面抗原共同抗原决定簇和另外组相互排斥的抗原决定簇和，可将表面抗原分为个血清型(，，，)。世纪年代中期以来，按主要抗原决定簇亚型的组合，又可将细分为个血清型(，，，，，，，，)。依照感染人类全基因系统进化的结果，又可将分别为个基因型( )。基因组序列分析现已成为描述病毒学特征的重要方法，基因型和血清型的分布均有明显的地区性[]。基因型、和在我国均有分布，分别占 ，和，其中和为优势基因型。，，，，和等种血清型也有分布，其中和为优势血清型，分别占和。基因型与血清型，基因型与血清型有非常密切的基因相关性。 抵抗力很强，可在 ℃下耐受小时；也能耐受一般浓度的消毒剂，然而在 ℃下煮沸分钟或高压蒸汽消毒可以使其灭活。在血清中 ℃- ℃时可保存个月，- 阳性可见于急性乙肝的潜伏期、急性期及慢性乙肝病毒感染状态。抗被认为是保护性抗体，表明患者曾感染过乙肝病毒或注射过乙肝疫苗。抗与病毒消失相关联。上世纪年代末年代初出现的扩增技术后，发现这种病人部分病例血液中可检出。抗中针对环抗体占，环上主要氨基酸残基变异部分变异可逃逸免疫系统的攻击，造成抗原检测时出现假阴性结果或抗原、抗体(针对原抗原决定簇)并存。 由前区和区共同编码，在启用前区起始密码翻译后切割引导肽和区末端部分多肽后分泌进入血液，是为。前区变异，突变产生终止密码，以至缺失；前区启动子和的双变异，使得前区的产生减少，使分泌减少。内仅含两个抗原决定簇和(仅含抗原决定簇和，两者之间空间构型有一定相关性)。抗单抗合用构建而成的抗体夹心法检测试剂盒特异性强；非抗和的单抗构建的试剂盒检测模式往往较差。基于上述原因血清通常采用抗体竞争抑制法来检测。启用区起始密码翻译形成。由于主要在核内装配为病毒核心，无引导肽，不易透过细胞膜(质膜表面的被认为是免疫细胞攻击的靶抗原)进入血液，碱性蛋白易诱导产生抗体以及在血液中易被蛋白酶水解等因素，在血液中常规检测方法不能检测[]。富含碱性氨基酸，免疫原性强，加之乙肝病毒在血液中滴度高、持续时间长，抗体滴度高而持久，即使在病毒消失后核心抗体仍能持续十年以上。 我国人群感染乙肝的状况 乙肝的主要传染源为乙肝患者和慢性病毒携带者，国内慢性携带者中，绝大多数同时呈阳性，在数量上占人群的，是主要的传染源。通过破损皮肤、粘膜进入机体，主要传播途径有体液、输血及血制品和母婴传播。感染多见于婴幼儿及青少年。 慢性乙肝病人治愈的可能性很小，病毒的自然阴转率小于，目前没有任何药物能够在多数患者中彻底清除乙肝病毒。我国人群携带情况 据年全国调查[]，用方法检测，携带率为，年省调查为 ；年全国调查为。年年全国肝炎血清流行病学调查结果，我国人群乙肝病毒携带率为，感染率为，其中同时感染乙型和丁型肝炎病毒，亿人已感染过乙肝病毒(其中亿人为携带者)，每年我国乙肝新发病人数约万人，约占全国传染病发病点