UC—MSC移植对CIA大鼠炎症因子表达水平的.docVIP

PAGE PAGE 1 UC—MSC移植对CIA大鼠炎症因子表达水平的 　　[摘要]　目的　观察脐带间充质干细胞（umbilical　cord　mesenchymal　stem　cells，UC-MSC）移植对胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠血清白介素-1（IL-1）、IL-10、IL-17、IL-18表达水平的影响，以探讨UC-MSC移植对CIA大鼠炎症因子的调控作用。　方法　90只SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、UC-MSC治疗组，每组各30只；采用鸡Ⅱ型胶原加完全弗氏佐剂建立CIA大鼠模型；治疗前后采用关节炎指数（AI）评分对大鼠关节炎症进行评估；以酶联免疫吸附试验（ELISA）检测各组大鼠治疗前后血清IL-1、IL-10、IL-17、IL-18水平变化。　结果　模型组血清IL-1、IL-17、IL-18水平均明显高于同期空白对照组，而IL-10水平则低于同期空白对照组，差异均有统计学意义（均P　＜　0.05）；UC-MSC治疗组治疗后第1、3周时IL-1、IL-17、IL-18水平低于同期模型组，IL-10水平高于同期模型组，差异均有统计学意义（均P　＜　0.05）；至第5周上述指标与空白对照组比较，差异均无统计学意义（均P　＞　0.05）。　结论　CIA大鼠存在免疫功能紊乱，其促炎症因子水平显著增高，抑炎症因子降低；UC-MSC能下调CIA大鼠促炎症因子水平，而上调炎症抑制因子，减轻机体免疫性炎症反应，促进疾病缓解。 　　[关键词]　脐带间充质干细胞；胶原诱导型关节炎大鼠；炎症因子；免疫调节 　　[中图分类号]　R593[文献标识码]　A[文章编号]　1673-7210（2012）12（c）-0032-03 　　类风湿关节炎（rheumatoid　arthritis，RA）是以累及周围性小关节为主的系统性、炎症性自身免疫疾病，以关节滑膜细胞增生、炎症细胞浸润及血管翳形成为主要病理特征[1]。脐带间充质干细胞（umbilical　cord　mesenchymal　stem　cells，UC-MSC）是来源于脐带华通氏胶的一类多能干细胞，具有独特的免疫调节功能，以抑制炎性反应为主要特征。本文以胶原诱导型关节炎（CIA）大鼠为研究对象，观察UC-MSC对CIA大鼠炎症细胞因子的调节作用，为临床应用UC-MSC治疗RA提供实验依据。 　　1　材料与方法 　　1.1　实验动物 　　5周龄，雌性，清洁级SD大鼠，90只，平均体重（175±10）g，购置于南京大学模式动物研究所。 　　1.2　实验方法 　　1.2.1　CIA大鼠模型建立①分组：90只SD大鼠随机分为三组：空白对照组、模型组、UC-MSC治疗组，每组各30只；②造模：扬州大学医学院实验动物中心清洁级环境中适应性饲养1周，模型组及UC-MSC治疗组在乙醚麻醉下于第1天以每只0.1　mL（含鸡Ⅱ型胶原0.25　mg及0.05　mL完全弗氏佐剂）于SD大鼠右后足跖皮内注射，至第21天同前剂量于大鼠尾根部、左后足跖皮内再次多点激发免疫。空白对照组以生理盐水注射，方法同造模组。 　　1.2.2　UC-MSC移植取融合度85%的P3代UC-MSC，用0.25%胰蛋白酶消化，生理盐水清洗3遍，制成浓度为2×106/mL细胞悬液，用1　mL无菌注射器抽吸分装成0.5　mL/支（含1×106个细胞）。于造模完成后1周经大鼠尾静脉注射制备好的UC-MSC悬液0.5　mL/只；空白对照组及模型组同法注射等量生理盐水。 　　1.3　观察指标 　　1.3.1　从免疫当日起，采用双人双盲的方式在初免后1、2、3周，及治疗后1～5周，每周观察并采用关节炎指数（AI）评分法评定大鼠关节症状的严重程度。 　　1.3.2　于UC-MSC移植治疗后第1、3、5周，分别取空白对照组及模型组、UC-MSC组大鼠，麻醉大鼠后，经腹腔静脉取血4　mL置分离胶干燥管中，以3　000　r/min、离心10　min后提取血清，置-20℃冰箱保存待测。用ELISA法检测血清白介素-1（IL-1）、IL-10、IL-17、IL-18。 　　1.4　AI评分法标准 　　据关节红肿范围和变形情况对大鼠进行评估。每只大鼠四肢评分相加，总分最高为16分。评价标准：0分=无关节炎；1分=有红色斑点或轻度肿胀；2分=关节部位中度肿胀；3分=严重肿胀，甚至皮肤破溃；4分=严重肿胀且不能负重。 　　1.5　统计学方法 　　采用Excel　2003软件及统计软件SPSS　16.0对实验数据进行分析，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，多组间比较采用方差分析，两两比较采用LSD-t检验。以P　　0.05为差异有统计学意义。 　　2　结果 　　2.1　CIA大鼠一般情况及关节症状 　　所有CIA大鼠饮食及活动减少，神疲乏力，体