经典液相色谱教学课件.ppt

经典液相色谱法 Liquid Chromatography,LC 第一节 概述 一、经典液相色谱法 ---以液体做流动相的经典色谱分离、分析方法。 经典液相色谱在现代分析中主要作为一种效能极佳的样品分离手段； 结合现代扫描检测仪器也常用作分析手段。 第二节 经典液相色谱分离机制 一、吸附分离机制： --利用样品各组分在吸附剂上的吸附能力的强弱及流动相（液体）的溶解解吸能力强弱使样品各组分在色谱体系中产生差速运动而达到分离。 固定相—吸附剂（固体） 如：硅胶 活性碳 分子筛 高分子多孔微球等 流动相—一种或几种溶剂的组合 利用重力或毛细作用力等作流动相的推动力。 第三节 液相柱色谱 一、经典柱色谱的基本操作： 1.选择合适的固定相，将固定相均匀填充于 一定长度、口径的色谱柱中； 2.选择合适的溶剂或溶剂组合作流动相，并 用该流动相淋洗、浸泡色谱柱； 3.取适量样品测试溶液加于柱顶端； 4.用上述流动相淋洗色谱柱，控制适当流速 并适时收集洗脱液。 第三节 平面色谱 一、基本概念： 平面色谱--固定相成平面状； 流动相称为“展开剂”； 微量样品集中点样于平面一点； 色谱分离过程称为“展开”； “展开”按一定方式完成反复多次作用； 展开剂在平面上的移动一般借助于毛 细作用力。 二、平面色谱法分类： 按平面材料的性质分： 纸色谱；薄层色谱；凝胶片色谱。 按分离原理分： 吸附色谱；分配色谱；离子交换色谱；体积排阻色谱；电泳等。 三、主要特点： 1.分离结果可较长时间保存； 2.样品用量少； 3.结合自动化扫描分析其分析结果能满足现 代分析要求。 四、平面色谱的基本操作： 1.根据分析对象性质几分析要求选择合适的 固定相，并将其制作成大小合适的平面 （或直接购置成品）； 2.活化固定相并合适保存； 3.将样品制作成溶液，定量取适量样品溶液以合适方式集中点样于平面一点； 4.选择合适的溶剂或溶剂组合做展开剂； 5.选择合适的展开方式，在专用容器内展开（分离）适当距离； 6.根据展开平面上的“斑点”定性、定量。 五、平面色谱分离结果： 平面（板）分离结果如下图所示： 1.色谱参数： ⑴比移值（Rf 值） Rf =原点至斑点中心距离/原点至溶剂前沿距离 Rf 值：①与组分性质有关； ②与操作条件有关； ③ 0≦Rf≦1； ④相邻斑点ΔRf的大小体现分离程度。 ⑵斑点面积（A ） A ①数值大小与组分量有关； ②形状与操作条件有关。 2.影响分离结果的因素： ⑴平面（板）的性质： --体现固定相对组分的作用力 纸色谱：固定相—滤纸上吸附的水； 分离原理—分配； 含水量的大小影响分离结果。 薄层色谱：固定相—硅胶（吸附剂）； 分离原理—吸附； 硅胶的活性影响分离结果。 凝胶片色谱：固定相—溶胀的凝胶； 分离原理—体积排阻； 凝胶的孔的性状影响分离结果。 * * 二、分类： 按操作状态分类： 柱色谱-column chromatography 平面（板）色谱-planar chromatography →薄层色谱-thin layer chromatography,TLC 纸色谱-paper chromatography,PC 按分离原理分类： 吸附色谱-absorption chromatography 分配色谱-partition chromatography 离子交换色谱-ion exchange chromatography 体积排阻色谱-size exclusion chromatography 亲和色谱-affinity chromatography 1.吸附过程及流出曲线： 根据吸附平衡方程： Cm ? Cs 平衡常数 K= Cs/ Cm 假设：在整个色谱分离过程中平衡保持，即 平衡常数 K 保持不变。 每一组分分别有其吸附平衡。 ⑴若 Cm ? Cs 即样品某组分完全被吸附剂滞 留或流动相对组分完全无解吸