第二章 菌种的选育、保存和复苏.pptVIP

第一节 菌种的分离 一、菌种的来源 根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买； 从大自然中分离筛选新的微生物菌种。 新菌种的分离是要从混杂的各类微生物中依照生产的要求、菌种的特性，采用各种筛选方法，快速、准确地把所需要的菌种挑选出来。 实验室或生产用菌种若不慎污染了杂菌，也必须重新进行分离纯化。 有了优良的菌种，还要有合适的工艺条件和合理先进的设备与之配合。 二、分离思路 从自然界中分离培养微生物是菌种选育的重要和基础的步骤。 到目前为止，还没有一种分离培养方法能揭示一个试样中所包含的所有微生物总数和种类。 在任一试样中所存在的微生物仅为极少数特定种类的菌株；在工业微生物筛选过程中，应及时调整检测方法，以与各种不同类型的生长和代谢之微生物相适应。 因此，建立一更为科学的和针对性不强的分离方法是必要的。 （一）成功的分离培养方法 (1)认真考虑所需产品的特征和生产过程； (2)制订初步的筛选标准； (3)将生态学方法运用到分离和筛选过程。 （二）培养分离中要解决的问题 1、“分离什么和从哪里分离出?” 2、必须充分考虑所分离微生物的生产能力、生 长速度、生物群体培养和产品生产工艺及其 提纯的难易和费用，工业生产发酵罐中稳定 性及遗传操作的难易程度等。 3、选择适宜的培养分离方法和检测方法。 （三）将生态学方法用于培养分离的一般思路要点 1、罗列出所要分离的微生物类群； 2、根据所采集样本的各种生态参数，描述所要分 离的微生物之生态系统或栖息地： 3、将若干样本分成若干类型，如植物和植物各 部，土壤(类型和土层)、岩石、水、昆虫和发 酵食品等； 4、罗列出所要考察和测量的环境参数，如pH、盐 分、水分、氧化还原电势及温度等； 5、列出生物系统中有用的自然底物，如森林土壤 中的几丁质、葡萄表皮的果胶； 6、根据上述1-5项中所获得的数据，设计分离方 法，即选择适宜的稀释液、底物、试样、天然 浸出汁和培养条件； 7、用标准方法作对照来评价生态学分离方法； 8、根据待检材料的生态参数需要，修改已知的方法； 9、运用特定的富集方法，富集那些可能具有筛选 意义的微生物类群。 定方案：首先要查阅资料，了解所需菌种的生长培养特性。 采样：有针对性地采集样品。 增殖：人为地通过控制养分或培条件，使所需菌种增殖培养后，在数量上占优势。 分离：利用分离技术得到纯种。 发酵性能测定：进行生产性能测定。这些特性包括形态、培养特征、营养要求、生理生化特性、发酵周期、产品品种和产量、耐受最高温度、生长和发酵最适温度、最适pH值、提取工艺等。 （一）采样 1、采样对象 以采集土壤为主。一般园田土和耕作过的沼泽土中，以细菌和放线菌为主，富含碳水化合物的土壤和沼泽地中，酵母和霉菌较多，如一些野果生长区和果园内。采样的对象也可以是植物，腐败物品，某些水域等。 2、采样季节： 以温度适中，雨量不多的秋初为好。 3、采土方式： 在选好适当地点后，用小萨子除去表土，取离地 面5-15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或 塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、 环境条件等，以备查考。为了使土样中微生物的 数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回， 以便及时分离。 （二）增殖培养 为了容易分离到所需的菌种，让无关的微生物至少是在数量上不要增加，可以通过配制选择性培养基，选择一定的培养条件来控制。 例如碳源利用的控制，可选定糖，淀粉、纤维素，或者石油等，以其中的一种为唯一碳源，那么只有利用这一碳源的微生物才能大量正常生长，而其它微生物就可能死亡或淘汰。这样对下阶段的纯种分离就会顺利得多。 厌氧或好氧、酸碱度的选择、特殊的生理特性、添加特殊的抑制剂 （三）培养分离 尽管通过增殖培养效果显著，但还是处于微生物的混杂生长状态。因此还必须分离，纯化。在这—步，增殖培养的选择性控制条件还应进一步应用，而且控制得细一点，好一点。纯种分离的方法有划线分离法、稀释分离法。 （四）筛 选 这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件，通过三角瓶的容量进行小型发酵试验，以求得适合于工业生产用菌种。 （五）毒性试验 自然界的一些微生物是在一定条件下产毒的，将其作为生产菌种应当十分当心，尤其与食品工业有关的菌种，更应慎重。据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作