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白念珠菌白-灰形态转换调控基因相关实验 2014级硕士开题报告 报 告 人：潘丽 专 业：皮肤性病学 2015年10月 目录 1. 研究背景与意义 2. 国内外研究现状 3. 实验设计 4. 预期结果及进展 5. 参考文献 1. 研究背景与意义 白色念珠菌（Candida albicans）是一种人类常见的机会致病真菌，常导致免疫系统受损的人群的粘膜表面或系统感染。白色念珠菌至少有七种不同形态，不同形态的菌落之间可以高频率的互相转换，不同形态之间的转换能力与白色念珠菌的致病能力密切相关。目前研究最多的是酵母形态-菌丝形态和白菌-灰菌形态转换。 白色念珠菌（Candida albicans）是一种 人类常见的机会致病真菌，存在于正常人的口 腔、上呼吸道、肠道、阴道中，一般情况下， 它是温和无害的，当机体免疫系统受损时可导 致人群的粘膜表面或系统感染。被视为“隐形 的杀手”【1】。 白色念珠菌至少有七种不同形态，不同形态 的菌落之间可以高频率的互相转换，不同形态 之间的转换能力与白色念珠菌的致病能力密切 相关。目前研究最多的是白菌-灰菌形态转换[2]。 研究背景 1. 研究背景与意义 welcome to use these PowerPoint templates, New Content design, 10 years experience 研究背景 白念的白菌细胞转换成灰菌细胞后能够稳定 传代，相反亦然。白菌在系统感染中具有较强 的致病力，灰菌在表皮感染中具有较强的致病 力。白菌-灰菌的转换受到基因的调控，转换的 频率受到温度的影响，高温和低温都影响白-灰 菌落的互相转换。 22-27℃：利于白菌细胞→灰菌细胞，灰菌细胞 保持稳定灰菌状态 ＞27℃：灰菌细胞则迅速转换为白菌细胞，转换 率达100%。 1. 研究背景与意义 研究意义 控制白色念珠菌的毒力，而不是完全杀灭 白念–已经成为一种新的治疗策略。通过实验能够找到调控白-灰转换的基因，可研发作用于靶基因的药物，使药物能暂时抑制白念珠菌侵袭性生长及形态转换，而保留共生的状态。最后，使用该药物即增加治疗白色念珠菌感染的效益，又降低抗菌药物的使用和减少多药耐药菌株出现的威胁。 2、国内外研究现状 *国外相关的文献报道对白-灰有 调控作用的基因有Efg1、TUP1、WOR1、 NRG1、EAP2、CZF2等【2】。 *调控的通路有RIM101和cAMP信 号通路【3】。 *国内仅有1篇文献提出白-灰转 换的关键基因是WOR1基因【4】。 3、实验设计 实验材料： （1）购买已知基因序列的白念珠菌白菌细胞菌株及野生型菌株； （2）质粒DNA，引物和DNA序列测定； （3）白色念珠菌文库； （4）各种酶类、试剂盒和特殊进口试剂； （5）缓冲液及其他溶液； （6）培养液和固体培养基； （7）其他试剂。 a b c d ... ... d c a ... c b a 3、实验设计 ... d b a ... d c b a b c d ... a b c d ... 敲除a基因 敲除b基因 敲除c基因 敲除d基因 不敲除基因 实验组 对照组 ........ 编号 1 2 3 4 ........ 3、实验设计 在这里输入可长可短标题 O T 注意事项： 1、实验条件：实验组、对照组均在相同的培养基中，25℃条件下培养，并进行白菌细胞的形态观察； 2、实验材料要求购买的白念珠菌为稳定状态的白菌细胞；野生型菌株则为随机菌株； 4.1、预期结果 实验组 白菌细胞 灰菌 白菌 对照组 白菌细胞 灰菌 列出锁定稳定白菌 状态的菌株编号和 对应的基因，说明 敲除该基因可能阻 断了白-灰转换，同 时说明该基因可能 只在灰菌中表达。 4.1、预期结果 举例：敲除了x基因的白菌细胞不能转换成灰菌细胞，那么我们推论敲除了x基因可能阻断了白-灰转换，同时推测该基因可能只在灰菌中表达。 验证实验：检测x基因在野生型菌株中的表达，x基因是否只在灰菌中表达，在白菌中不表达，是否呈“全或无”的双稳态模式？ 4.2、预期进展 *2015年11月—2016年2月：继续查阅文献，学习实验方法 *2016年3月—8月：进行实验 *2016年9—2017年4月：数据整理、分析、撰写论文，课题鉴定、论文答辩 5、参考文献 【1】现在真菌学 【2】Guanghua Huang,Huafeng Wang,song Chou,Xinyi Nie.Bistable expression of