实验六 螺旋体、衣原体、真菌、病毒.pptVIP

第六次实验 螺旋体 衣原体 真菌 病毒 实验目的 掌握螺旋体的形态特征及Fontana镀银染色法 了解衣原体的检测方法 掌握真菌的基本形态，熟悉真菌的菌落特征 掌握乙肝病毒表面抗原检测的ELISA方法 实验内容 螺旋体 钩端螺旋体的镀银染色片(示教) 口腔中螺旋体检查(个人操作) 衣原体的检测(免疫层析法) (操作示教) 真菌 白念珠菌革兰氏色标本片(示教) 白念珠菌的假菌丝和厚膜孢子(示教) 白念珠菌的芽管 (示教) 新生隐球菌的荚膜(示教) 真菌的菌落形态的观察(示教) 乙肝病毒表面抗原的检测(ELISA法)(小组) 一、螺旋体 1.属于原核细胞型微生物 2.分类： 疏螺旋体属：奋森氏螺旋体 密螺旋体属：梅毒螺旋体 钩端螺旋体属：钩端螺旋体 3.染色： Fontana镀银染色（菌体呈棕褐色） 口腔奋森螺旋体检测 取牙垢少许+生理盐水混匀制片。 室温干燥 加固定液，固定1~2分钟，用水冲洗。 加媒染液，加温至有蒸汽出现，作用30秒，水洗。 加硝酸银染液，加温至有蒸汽出现，染30秒。水洗，待干镜检。 镜下螺旋体呈棕褐色。 二、衣原体 1.是一类能通过细菌滤器，严格细胞内寄 生，有独特发育周期的原核细胞型微生物。 2.对人致病的主要有： 沙眼衣原体 肺炎衣原体 鹦鹉热衣原体 沙眼衣原体抗原检测（乳胶免疫层析法） 原理： 系用抗衣原体脂多糖单克隆抗体和兔抗鼠IgG多克隆抗体分别固定于固相硝酸纤维素膜，并和乳胶标记的另一抗衣原体脂多糖单克隆抗体及其他试剂和原料制成，应用乳胶免疫层析技术，采用双抗体夹心的形式建立的衣原体检测方法，用于女性宫颈和男性尿道中沙眼衣原体抗原的检测。 沙眼衣原体抗原检测（免疫层析法） 操作步骤： 将棉拭标本浸没在含5滴提取液的提取管中并搅动。 将带有棉拭标本的提取管放入80℃水浴箱加热10-20分钟。 取出提取管，按压棉拭以去除其上的液体，然后丢弃棉拭。静置至少5分钟。 取出一个试剂板，在标本窗滴上5滴提取液，15分钟内在结果窗观察结果。 三、真菌 真菌：有细胞壁、典型细胞核，不含叶绿素，不分根、茎、叶的真核细胞型微生物。细胞质内有完整的细胞器。 特性：种类多、分布广 与人类的关系：大多对人无害，有的对人类有益。与医学有关的真菌达百余种，可引起人类感染性、中毒性及超敏反应性疾病 (一)真菌的形态与结构 营养菌丝 菌丝 气生菌丝（生殖菌丝） 大分生孢子 无性孢子 分生孢子 小分生孢子 （病原性） 叶状孢子 芽生孢子 关节孢子 孢子 厚膜孢子 孢子囊孢子 有性孢子 (二)真菌的菌落 四、病毒 病毒是一类体积微小，结构简单，只有一种类型核酸(DNA或RNA)，在活的易感细胞内以复制方式增殖的非细胞型微生物。 是传染病的主要病原体 至今尚未找到抗病毒的特效药 包括无包膜病毒和有包膜病毒 乙肝病毒表面抗原的检测(ELISA法) 原理： 将纯化抗HBS吸附于固相载体表面，加入受检血清，如其中含有HBsAg，则与载体上的抗HBs结合，形成抗HBS-HBsAg复合物。再加入酶标记抗HBS，使之与上述复合物中的HBsAg结合，再与底物作用而显色，底物颜色的改变与HBsAg量成正比。 乙肝病毒表面抗原的检测(ELISA法) 操作步骤： 加样：取一定量的预包被酶联板。依次加入待测标本及阴、阳性对照各50ul，同时加入酶结合物50ul（空白对照孔不加），混匀，置37℃温育60分钟。 洗板：弃去反应孔内液体，在吸水纸上拍干；用洗涤液(1:20稀释)注满各孔，静置10-20秒，甩掉洗涤液，拍干。重复洗板共5次。 乙肝病毒表面抗原的检测(ELISA法) 操作步骤： 显色：依次在每孔加显色剂A液、B液各50ul，混匀，置37℃温育15分钟。? 终止：依次在每孔加终止液50ul，混匀。? 结果：阳性标本－－显黄色， 　　　　阴性标本－－不显色。 作业 微生物学实验报告册P3-5。 * *