第二十四章病毒与细胞相互作用.pptVIP

能够使半数组织细胞在一定条件下发生细胞病变的病毒量。用于判定病毒的毒力。 50%组织细胞感染量（TCID50） （二） 空斑试验 plaque assay 细胞单层接种病毒后再覆盖一层含营养液的琼脂层。这样病毒自然感染释放后不能悬浮于液体中，只能感染邻近与之接触的细胞，以致感染区由原始病灶向四周扩大，形成类似细菌的菌落，此即空斑试验。 空斑是由一个感染性病毒粒子复制形成的，类似于细菌的菌落，称为空斑形成单位（PFU）。病毒悬液中的感染性病毒量以每毫升含有的PFU来表示。 CELLS 空斑试验的用途： 1. 测定病毒数量 2. 纯化病毒 单个空斑作悬液，梯度稀释后再作空斑，可获得病毒克隆。 3. 鉴定病毒 不同病毒的空斑具有不同的特征。 （三）包涵体（inclusion body) 定义：是某些病毒感染细胞产生的特征性的形态变化，在普通光学显微镜下可见胞浆或胞核内出现的呈嗜酸性或嗜碱性染色、大小数量不等的圆形或不规则形的团块状结构，称为包涵体，又称为内基氏小体（Negri body）。 包涵体的性质 病毒成分的蓄积，如狂犬病毒的Negri氏体 大量晶格样排列的病毒颗粒组成，如腺病毒的包涵体 细胞变性的产物，不含病毒，如疱疹病毒的包涵体 狂犬病毒包涵体（Negri body） 定义：细胞利用內源或外源的小分子双股RNA片段，特异性地降解同源基因的mRNA，从而导致靶基因转录后基因沉默（post translational gene silence, PTGS）的现象。 二、RNA干扰（RNA interference, RNAi） 定义：由病毒或诱生剂刺激机体细胞产生的具有抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用的糖蛋白。 种类：α、β、γ干扰素。 抗病毒作用：干扰素不直接作用于病毒，而是作用于邻近的细胞，使其产生抗病毒蛋白，这些抗病毒蛋白降解病毒mRNA、抑制蛋白合成。 干扰素作用具有宿主特异性，而无病毒特异性。 三、干扰素（IFN） 干扰素抗病毒机制 复习思考题 1. 试比较病毒培养不同方法及其优缺点。 2. 原代细胞、二倍体细胞和传代细胞系的概念。 3. CPE、PFU、空斑、包涵体和干扰素的概念。 4. 试述干扰素的抗病毒机制。 * * 兽 医 微 生 物 学（Veterinary Microbiology） 肖书奇 动物医学院预防兽医学系 E-mail：xiaoshuqi@nwsuaf.edu.cn 电话第四章 病毒与细胞间的相互作用 第一节 病毒的细胞培养 第二节 病毒与细胞的相互作用 第一节 病毒的细胞培养 病毒是严格的细胞内寄生微生物，培养病毒必须使用细胞。根据病毒的不同选用敏感动物（动物接种）、鸡胚（鸡胚接种）或离体细胞进行分离培养（细胞培养）。 一、动物接种 接种后通常以动物发病、死亡作为感染的指标。 按病毒侵袭部位不同选择适当的接种途径。嗜神经病毒接种在小鼠的脑内。痘苗病毒和单纯疱疹病毒接种于家兔角膜。 动物接种的优缺点： 优点：（1）不需要复杂的仪器设备； （2）技术简单； （3）易成功 缺点：（1）个体差异大 （2）价格昂贵 （3）数量有限 （4）需要隔离畜舍 二、鸡胚接种 一种比较经济简便的方法。 卵壳 壳膜 接种途径 绒毛尿囊膜接种 9-13日龄尿囊腔接种 9-10 日龄 卵黄囊接种 6-8日龄 羊膜腔接种 10日龄 脑内接种 10日龄 1气室 2卵壳 3卵黄囊 4卵白 5 尿囊腔 6绒毛尿囊 7胚胎 8羊水腔 9胚胎外腔 鸡胚接种的优缺点： 优点：技术简单、来源充沛、价格低廉、数量可大， 不需特殊设备 缺点：很多病毒不能适应，主要是哺乳动物的病毒。 细胞培养(cell culture)是指利用机械、酶或化学方法使动物组织或传代细胞分散成单个乃至2～4个细胞团悬液进行培养。 三、细胞培养 每个细胞生理特性基本一致，对病毒易感性相等 无个体差异，准确性和重复性好 可严格执行无菌操作 细胞培养本身就能显示病毒的生长特征 应用空斑技术可进行病毒的克隆化 优点： 根据细胞来源、染色体特征及传代次数，可分为三种类型： 原代细胞：动物组织经胰蛋白酶消化处理，使细胞分散而得到的细胞。 二倍体细胞：将长成单层的原代细胞消化分散成单个细胞，继续培养传代，其染色体数与原代细胞一样，保持其二倍染色体数目的细胞，称为二倍体细胞。 传代