GB/T 21674-2008猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法.pdf

ICS 11.220 B 41 中华人民共和国国家标准 GB/T 21674—2008 猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法 Detecting porcine circovirus with polymerase chain reaction 2008-04-09 发布 2008-06-01 实施 发布 GB/T 21674—2008 前 言 本标准附录A为规范性附录。 本标准由中华人民共和国农业部提出。 本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。 本标准起草单位:农业部兽医诊断中心。 本标准主要起草人 ：出克恭、王宏伟、孙明、王传彬、陈西钊。 T GB/T 21674—2008 引 言 猪圆环病毒依据其致病性和基因组差异分为无致病性的猪圆环病毒 I型(porcine circovirus typel, PCV-1)和有致病性的猪圆环病毒II型(porcine circovirus type2,PCV-2) 。PCV-2是引发仔猪断奶后多 系统衰弱综合征(post-wcaning multisystem wasting syndrome,PMWS)的主要病原 。该病主要以患畜 生长迟缓、进行性消瘦和多系统病理损伤为特征 ，给世界各国主要养猪地区的规模化养猪业造成了一定 的经济损失。 n GB/T 21674—2008 猪圆环病毒聚合酶链反应试验方法 1范围 本标准规定了猪圆环病毒 （PCV）聚合酶链反应（PCR）检测方法的技术要求。 本标准适用于猪血清和组织中的猪圆环病毒检测，以及其I型 （Pcv-1）和n型 （Pcv-2）的鉴别。 2实验室生物安全要求 试验操作应在生物安全II级 （BSL-2级）以上的实验室进行。 3实验材料、仪器设备和试剂 3. 1实验材料 眼科剪、眼科银、称量纸、10 mL 一次性注射器、1. 5 mL灭菌离心管、0. 2 mL薄壁PCR管、琼脂糖、 500 mL量筒、500 mL锥形瓶、吸头 （10 »L 、200 卩L 、1 000 卩L） 、灭菌双蒸水。 3.2仪器设备 分析天平、高速离心机、真空干燥器、PCR扩增仪、电泳仪、电泳槽、紫外凝胶成像仪 （或紫外分析 仪）、液氮罐或一70 冰箱、微波炉、组织研磨器、一2（T 冰箱、水浴锅、可调移液器 （最大量程为2卩L、 20 卩L 、200 mL,1 000 ML） 0 3.3试剂 本标准所用试剂，除特殊标注外，均为分析纯。 3.3. 1消化液（见第A. 1章）。 3.3.2 2%蛋白酶K溶液 （见第A.2章）。 3.3.3酚-三氯甲烷-异戊醇混合液 （见第A. 3章）。 3. 3.4 2. 5 mmol/L dNTP（见第 A. 4 章）。 3.3.5 10 pmol/ML P V 引物（见第 A. 5 章）。 3.3.6 0. 5 U/mL Taq DNA 聚合酶 （见第 A. 6 章）。 3. 3. 7 10倍PCR缓冲液（见第A. 7章）。 3. 3. 8漠化乙锭 （EB）溶液（见第A. 8章）。 3. 3. 9电泳缓冲液（50倍） （见第A. 9章）。 3. 3. 10 1%琼脂糖凝胶 （见第A. 10章）。 3.3. 11上样缓冲液（见第A. H章）。 3.3.12异丙醇。 3.3. 13 75%乙醇（见第 A. 12 章）。 3.3. 14 15 mmo