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- | 2008-12-31 颁布
- | 2009-05-01 实施
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ICS 11.220
B 41
中华人民共和国国家标准
GB/T 22915—2008
口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法
Protocol of universal fluorogenic RT-PCR for foot and mouth disease virus
2008-12-31 发布 2009-05-01 实施
发布
GB/T 22915 2008
-1.Z- —1—
刖 弓
本标准参考了世界动物卫生组织 (()IE) 《陆生动物诊断试验和疫苗手册(哺乳动物、禽鸟与蜜蜂)》
(第5版)。
本标准的附录A 、附录C为规范性附录,附录B为资料性附录。
本标准由中华人民共和国农业部提出。
本标准由全国动物防疫标准化技术委员会归口。
本标准起草单位:中华人民共和国深圳出入境检验检疫局、中华人民共和国云南出入境检验检疫
局、中国检验检疫科学研究院°
本标准主要起草人:花群义、杨云庆、秦智锋、周晓黎、卢体康、董俊、陶虹、阮周曦、叶弈优、林祥梅、
吴绍强。
T
GB/T 22915—2008
口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测方法
1范围
本标准规定了口蹄疫病毒荧光RT-PCR检测的操作方法。
本标准适用于动物及其动物产品中口蹄疫病毒的检测。
2缩略语
下列缩略语适用于本标准。
2. 1 荧光 RT-PCR
荧光反转录-聚合酶链反应。
2. 2 Ct 值
每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值吋所经历的循环数。
2.3 RNA
核糖核酸。
2.4 DEPC
焦碳酸磷酯。
2.5 PBS
磷酸盐缓冲盐水,配方见附录Ao
2. 6 Taq 酶
TaqDNA聚合酶。
2.7 FMDV
口蹄疫病毒。
3原理
根据口蹄疫病毒各型共有的基因特定序列的保守片段,合成一对通用的特异性引物和一条通用的
特异性探针 。荧光探针的5端标记FAM荧光素,3端标记TAMRA荧光素,3 ’端的淬灭基团在近距离
内能吸收5端报告荧光基团发出的荧光信号 。但在扩增时 ,由于八他酶的5~3 ‘的外切活性,在延伸
到荧光探针吋,将其切断,两基团分离,淬灭作用消失,荧光信号产生 。因此,可以通过检测荧光信号对
核酸模板进行检测。
4材料与试剂
4. 1仪器与器材
4. 1. 1荧光RT-PCR检测仪。
4. 1.2高速台式冷冻离心机 (离心速度12 000 r/min以上)。
4. 1.3 台式离心机(离心速度3 000 r/min) 0
4.1.4混匀器。
4. 1.5 冰箱 (2 C〜8 °C和一20 C两种)。
4. 1.6微量可调移液器 (5 mL,10 mL,100 /丄,1 000 卩L)及配套带滤芯吸头。
4. 1.7 Eppcndorf 管 (1. 5 mL)、透明薄壁 PCR 管 (0. 2 mL)。
1
GB/T 22915 2008
4.2试剂
4.2.1除特别说明以外,本标准所用试剂均为分析纯,所有试剂均用无RNA酶污染的容器(用DEPC
水处理后高压灭菌)分装。
4.2.2三氯甲烷。
4.2.3异丙醇:一2OC预冷。
4.2.4
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