第四五六章 白细胞抗原检测.ppt

人类白细胞抗原(HLA) HLA抗原分布相当广泛，见于所有的有核细胞上，但在淋巴细胞上的密度最高 血小板上的HLA抗原是血小板膜表面的固有结构成分，主要是HLA-I类的A、B位点的抗原 HLA-I类抗原是引起血小板同种免疫和血小板输注无效的主要抗原，约占80% HLA抗原检测技术 人类白细胞抗原检测技术已广泛应用于器官移植前的组织配型 检测方法：血清学方法、细胞学方法和基因分型方法 与临床输血的关系—HLA抗原可引起免疫应答→HLA抗体→发热性非溶血性输血反应和血小板输注无效 HLA血清学方法 血清学方法：是用一系列已知的抗HLA抗原的标准血清来检测未知淋巴细胞表面的HLA抗原型别。 原理：淋巴细胞膜表面具有HLA抗原，而分型血清中含有抗特定HLA抗原的细胞毒抗体，该抗体与淋巴细胞膜上的相应的HLA抗原结合后在补体的参与下损伤细胞膜，经染料染色后，通过观察细胞是否被染色来判断待测细胞是否损伤或死亡，进而判断抗原、抗体反应的强度。 微量淋巴细胞毒试验记分 抗血清的来源和标准 ①通过妊娠、输血和同种器官移植等免疫作用产生HLA同种抗体 ②使用纯化的HLA抗原免疫动物，可产生HLA异种抗体 ③使用杂交瘤技术，可获得单克隆抗体 ④少数存在的天然抗体 质量标准 1.血清特异性程度（FP《3%，FN《14%） 2.血清的强度，采用强度指数SI表示，SI》70% HLA细胞学方法 ①纯合细胞分型方法 ②预致敏淋巴细胞试验 ③混合淋巴细胞培养 纯合细胞分型方法 该方法的原理为带有A/A纯合抗原的细胞（HTC）作为刺激细胞，带有未知抗原X/X的检测细胞作为应答细胞，在两种细胞组成的单向混合淋巴细胞培养反应（MLC）中，如果发生刺激反应，表明受检细胞能够识别A抗原当成外来抗原，所以受检细胞不具有A抗原，反之受检细胞可能是A抗原的 杂合子或纯合子 预致敏淋巴细胞试验 在应答细胞A与刺激细胞B的初次混合淋巴细胞培养反应(MLC)中，经过9-12天培养，应答细胞A增生为淋巴细胞后变成小淋巴细胞，即为预致敏淋巴细胞（PL） 混合淋巴细胞培养 两个无关个体的淋巴细胞，在体外适当的 环境下混合培养后可以互相激发，使细胞活化并向母细胞转化，产生分裂增生现象，即为混合淋巴细胞培养方法（MLC）。 现MLC主要用于实体器官移植前的快速相容性检测。分双向MLC和单向MLC HLA基因分型方法 PCR限制性片段长度多态性（PCR-RFLP） 序列特异性引物PCR（PCR-SSP） PCR序列特异性寡核苷酸探针分型技术（PCR-SSO） PCR单核苷酸序列分析（PCR-SBT） 基因芯片 流式细胞术 粒细胞抗原、抗体检测 血清学方法 ①粒细胞凝集试验（GAT） ②粒细胞免疫莹光试验（GIFT） ③单克隆抗体特异性粒细胞抗原捕获试验（MAIGA） ④ELISA方法 ⑤流式细胞术 基因分型技术 主要方法为PCR-RFLP PCR-SSP PCR-SSO等 1、PCR序列特异性引物 2、PCR限制性片段长度多态性 血小板血型抗原 血小板血型抗原主要有两大类： 血小板相关抗原 血小板特异性抗原。 血小板相关抗原：血小板表面存在的与其他细胞或组织共有的抗原 血小板特异性抗原（HPA）：通常将血小板表面由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板特有的遗传多态性，并且不存在于其他细胞和组织上的抗原。 血小板相关抗原 1、红细胞血型抗原：血小板上的ABH抗原物质，包括机体所产生的以及由血浆中黏附在血小板表面的两类抗原构成。 2、HLA系统血型抗原：血小板表面主要存在HLA-Ⅰ类抗原，如HLA-A、HLA-B、HLA-C位点等 血小板特异性抗原 血小板特异性抗原(HPA)是由血小板特有的抗原决定簇组成，表现出血小板独特的遗传多态性，不存在于其它细胞和组织中 ，目前已发现的血小板特异性抗原已有8个系统16个抗原 国际命名原则是：① 在系统前冠以HPA，即人类血小板抗原的英文缩写。②各抗原系统以公布日期的顺序编号。③对偶抗原按人群中频率由高至 低用字母命名 (例如HPA-1a,HPA-2b) 血小板特异性抗原 在白种人中HPA-1b表现频率是26.5%，是引起白种人血小板输注无效发生的主要血小板特异抗原 在亚洲人中 HPA－2b抗原频率约为 26％，是引起亚洲人血小板输注无效发生的主要血小板特异抗原。 血小板血型的临床应用 一、血小板输注无效 定义：血小板输注无效-指患者输注一定量的血小板后其增加值明显低于预期值 血小板输注无效是由于患者反复输注血小板而产生了血小板同种抗体，导致再次输入血小板时，发生免疫反应。 主要是由血小板HLA抗原（HLA-A，-B，-C）以及少数HPA抗原引起的， HLA抗体在所有病人中达到50%-