MHC多聚体分子免疫学ppt课件.ppt

CD1d-restricted iNKT Cells IL- 4, -10, -13 IFN-g??IL-17,TNF?a NK1.1 Surface phenotype -- TCRint, NK1.1+, CD4+ or CD4-CD8- TCR usage -- Va14-Ja18 (Va24-Ja18 in human), preferentially associate with Vb8, Vb7, and Vb2 Can be detected by ?-galactosyl ceramide(?- GalCer) -loaded CD1d tetramers Rapid release of cytokines upon activation Immunological functions -- immune responses against pathogens, anti-tumor immunity, autoimmunity CD1d Invariant TCR Type I NKT cell (iNKT cell ) APC MR1分子提呈途径 Lars Kjer-Nielsen, et al, Nature, 2012, Nov, 491: 717-723 α1 α2 α3 β2m 6-FP 6-FP α1 α2 β2m α3 90o rotation MR1 HFE MHC-1 CD1d MR1限制性T细胞－MAIT细胞 * MAIT- Mucosal associated invariant T cells * Surface phenotype: Mainly DN, some CD8αα in human TCR usage: Semi-invariant: mVα19/mVb6, 8 hVα7.2-Ja33/hVb2, 13 Predominantly in the Gastrointestinal tract; abundant in human blood and liver. Absence in germ-free mice Can be detected by MR1-6-FP tetramer Comparison of NKT and MIAT cells 抗原特异性T细胞的检测方法 传统功能实验 依赖于抗原特异性T细胞在体外的增殖活力及细胞毒效力的功能试验 氚标记胸腺嘧啶核苷（3H-TdR）掺入率测定T细 胞的增殖水平 MTT法测增殖 Cr51释放法检测T细胞的特异性杀伤功能 LDH法测杀伤 细胞增殖实验原理 加3H标记的DNA前体 (3H胸腺嘧啶苷，3H-TdR) T细胞增殖表现为DNA复制， 细胞合成DNA量倍增 3H-TdR掺入新合成的DNA中 根据掺入的多少 推测细胞增殖程度 细胞杀伤实验原理 靶细胞被特异性杀伤 51Cr释放入培养上清 51Cr掺入培养的靶细胞中， 使其摄入胞内 上清中的辐射强度即可 计算出特异性CTL的杀伤效率 传统功能实验定量检测T细胞功能 有限稀释法（LDA） 将T细胞有限稀释为单个细胞 利用功能实验检测有功能的T细胞数目 计算抗原特异性T细胞的前体频率 细胞内细胞因子染色检测T细胞功能 T细胞接受抗原特异性刺激后发生分泌细胞因子的功能效应 通过检测分泌细胞因子的T细胞检测抗原特异性的T细胞 ELISPOT法检测抗原特异性T细胞 检测的细胞分泌细胞因子 抗细胞因子抗体包被固相载体 加入酶标细胞抗体，显色 阳性斑点代表特异性T细胞 几种定量检测抗原特异性CTL的方法比较 方法 分析类型 功能 限制 LDA 功能分析 细胞总体功能分析 体外至少培养6-7天 操作比较烦琐 敏感性低10-100倍 ELISPOT 功能分析 单细胞水平分析 所需细胞数较少 操作可自动化 培养1-2天 不能回收细胞进行一步功能研究 敏感性低30倍 pMHC四聚体 物理分析 可对标本直接检测 可收集所需细胞进行进一步功能分析 四聚体制备后，操作简便、敏感度高 需要制备相应的四聚体 受HLA-多态性的限制 ? THANK YOU SUCCESS * * 可编辑 1936年，R.Gorer利用近交系小鼠研究发现：小鼠的自发肿瘤移植到同系小鼠体内能够生长，但在不同系小鼠则遭排斥；这种排斥作用不仅针对肿瘤，也针对供者正常的组织、细胞；还发现决定移植物排斥的基因与红细胞抗原2的基因一致，故将其称为H-2系统。 1