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抑菌试验方法总结;实验内容;实验六、抗菌药物的体外抑菌实验 ;耐 药 性;【基本原理】
抗菌活性：是指抗菌药抑制或杀灭病原微生物的能力。
两种测定方法：体外与体内（化学治疗实验）；
评价指标：
（1）最低抑菌浓度（MIC）：
能够抑制培养基中细菌生长的最低浓度。
（2）最低杀菌浓度（MBC）：
能够杀灭培养基中细菌的最低浓度。;【试剂与器材】 细菌菌液（如金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠杆菌、沙门氏杆菌）、药液（青霉素、链霉素、磺胺嘧啶钠、四环素）、碘酒、牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、氢氧化钠、高压灭菌器、小试管、试管架、吸管、平皿等。
256μ/ml青霉素溶液：
药敏试纸的准备：
;【实验步骤】
一、纸片法 以灭菌小棉签取金黄色葡萄球菌液（每ml约含3亿个细菌），注意不宜蘸取过多，以刚浸湿整个棉签为度，轻轻地从四个不同方向平行交叉划线，使菌液均匀涂布于整个琼脂平板上。同样方法，也可制作大肠杆菌平板备用。 ;二、纸片法 取已经制备好的4种药敏片：青霉素16万u/ml 、链霉素10万u/ml 、10%磺氨嘧啶钠、四环素0.05g / ml ，放置在已接种细菌的琼脂平板表面的不同区域。为了位置间隔准确，最好事先在平皿底用蜡笔作上记号。 将培养皿置37℃培养24h，观察纸片周围有无抑菌环，并测量抑菌圈的直径，比较各药的抗菌效力。样例如下图： ;下一张 ;下一张 ;细菌 ;二、试管二倍稀释法 取灭菌小试管10支，按照1至10编号，排列于试管架上。按照无菌操作，从第一管到第10管，分别加入牛肉膏汤1ml。用吸管吸取256μ/ml的青霉素溶液1ml放入第一管，并反复吹匀；接着从第一管吸出1ml放入第二管同样吹匀后吸出1ml放入第三管，依次逐管进行稀释到第８管，第10管不加青霉素液，作细菌对照组，第９管只加药物，不加菌液，作为药物对照组。 ;;1-8，10各加入培养18 h并用牛肉膏汤稀释至5×107～108 cfu/ml的金黄色葡萄球菌菌液0.5ml。放入37℃培养箱内培养24h后，取出观察细菌生长情况。
以能抑制细菌生长的最小浓度为青霉素对该细菌的最低抑制浓度（MIC）。
最低杀菌浓度（MBC）
结果记录于下表： ; 管号 ;【注意事项】
1. 接种细菌时要在无菌条件下均匀涂抹；用过的棉签火焰烧灼后丢弃。
2. 用试管二倍稀释法测MIC值，稀释时注意
稀释的顺序；每次移液前注意清洗吸管。
3. 药敏片之间要间隔适当距离，以免抑菌圈
出现交叉。
4. 四人一组，纸片法每人一个平皿，作四种药物对一种菌的作用，同组每人所接菌种不同，平皿上做好记号。结果记录时将本组结果综合。
;【思考题】
分别以抑菌圈的大小和MIC值来比较常见药物对金黄色葡萄球菌的作用强度。;Careful ,then successful !
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