广州大学小鼠离体细胞培养实验报告.docVIP

. PAGE . 广 州 大 学 综合设计性实验报告 学 院 生 命 科 学 学 院 課 程 细 胞 生 物 学 实 验 实验项目 实验六 细胞培养 实验题目 小白鼠肝细胞的原代培养 专 业 生物技术 年级、班别 14级 姓 名 陈子禧 学 号 1414300004 任课教师 陈 鲲 完成日期 2016 年 5 月 23 日 [摘要] 目的 掌握小鼠肝细胞、表皮细胞的体外培养方法。 采用脱臼法处死小鼠，用植块培养法（用眼科剪把肝组织剪成小于1mm3大小的植块，接种于培养瓶中进行体外培养；并用单细胞培养法（酶解法）进行肝细胞以及表皮细胞的培养。通过光镜观察细胞形态 结果?成功地培养出肝细胞、表皮细胞。肝细胞植块组在体外培养一个星期仍能够保持良好的生长状态。结论?本实验成功地实现了肝细胞的体外培养方法，尤其在植块培养组中效果更为明显。 关键词 原代培养 小白鼠 植块培养 酶解法 肝细胞 表皮细胞 目录 1前言 2实验原理 3实验用品 3.1试剂 3.1.1 培养液 3.1.2 Hank液 3.2 仪器 3.3 材料 4 实验方法 4.1 前期消毒灭菌 4.2 实验步骤 5 实验结果 5.1.图片展示 5.2.结果分析 5.3结果汇总 6 结果分析与讨论 7 参考文献 8 致谢 1前 言 目的 了解肝细胞、表皮细胞原代细胞培养的基本方法及操作过程。学习植块培养法、单细胞培养法（酶解法）、营养液的配制及酸碱度的调节。初步掌握无菌操作方法。意义 ：细胞培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实验技术。当前，细胞培养技术广泛应用于分子生物学、遗传学、免疫学、肿瘤学、细胞工程等领域，已发展成为一种重要的生物技术。［1］方法 ：采用肝组织块外植培养法通过无菌造作培养新生小鼠细胞。 结果 ：运用这种方法成功地培养出原代肝细胞 。结论 ：这种方法为广泛开展肝细胞原代培养奠定了基础。 2实验原理 原代细胞培养是指直接从动物体内获取的细胞、组织或器官，经体外培养后，直到第一次传代为止。这种培养，首先用无菌操作的方法，从动物体内取出所需的组织（或器官），用植块培养法，在人工培养下，使其不断地生长及繁殖。 细胞培养是一种操作繁琐而又要求十分严谨的实验技术。在准备过程中我们要是细胞能在体外长期生长，必须满足两个基本要求：一.是供给细胞存活所必须的条件，如适量的水、无机盐、氨基酸、维生素、葡萄糖及其有关的生长因子、氧气、适宜的温度，注意外环境酸碱度与渗透压的调节。二.严格控制无菌条件。 3实验用品 3.1器材 眼科剪（尖头、弯头）各一把、眼科镊（尖头）一把、培养皿一个、试管一支、（直、弯）吸管各一支、刻度吸管一支、吸管胶头三个、小烧杯一个、培养瓶一个等。上述器材均须彻底清洗、烤干、包装好，9.9×10 4Pa （15磅）灭菌30min，备用。此外，还有显微镜、酒精灯、酒精棉球、碘酒棉球、试管架、标记笔、恒温箱。 3.2试剂 3.2.1培养液 RPMI-1640 (2-3ml/培养瓶）, 基础培养基 80-90%、胎牛血清 10-20%、双抗 1-2% ,主要提供生长因子和细胞因子。抗菌素：1万单位青、链霉素占1%。 3.2.2组织清洗液 hanks液、PBS（Phosphate-Buffered Sallines） 3.3 材料 小白鼠幼体2只 4实验方法 4.1前期准备工作 4.1.1 对玻璃仪器进行清洗 （1）浸泡：清水浸泡12小时 （2）刷洗：清洁剂、毛刷刷洗，清洁剂清洗2次，自来水冲洗5次，烘箱50℃烘干 （3）然后再浸入 5 ％稀盐酸中 12 小时以除去脏物、铅、砷等物。（4）刷洗、烘干：12 小时后立即用自来水冲洗，再用洗涤剂刷洗，自来水冲干净后用烤箱烘干。（5）泡酸、清洗：用清洁液（重铬酸钾 120g