项目九细胞培养技术.ppt

项目导入：Vero细胞和狂犬病毒的培养工艺 动物细胞培养、 动物细胞融合、 单克隆抗体、胚胎移植、动物细胞核移植等 动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础。 动物细胞培养和核移植技术 动物细胞培养就是从动物机体内取出相关的组织，将它分散成单个细胞，然后，放在适宜的培养基中，让这些细胞生长和增殖。 3.动物细胞生长特性： 细胞贴壁： 悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上， 称为细胞贴壁。 要求： 培养瓶或培养皿的内表面光滑、无毒、易于贴附。 细胞的接触抑制： 当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时，细胞就会停止分裂增殖，这种现象称为细胞的接触抑制。 动物细胞培养条件： 1、无菌、无毒的环境 （添加一定量的抗生素，定期更换培养液） 2、营养 （葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素、动物血清等。） 3、温度和PH 36.5+（-）0.5度, 7.2-7.4 4、气体环境： O2和CO2（95%空气和5% CO2 ） 二、动物体细胞核移植技术: 将动物的一个细胞的细胞核，移入一个已经去掉细胞核的卵母细胞中，使其重组并发育成一个新的胚胎，这个新的胚胎最终发育成动物个体。 用核移植的方法得到的动物称为克隆动物 1、在动物细胞培养过程中遗传物质发生改变的细胞是 --------------------（　 ）　　 A．细胞系 B．细胞株 C．原代细胞 D．传代细胞 2、动物细胞工程技术的基础是 ------（　）　 A.动物细胞融合 B.单克隆抗体　 C.胚胎移植 D.动物细胞培养 A D 3、用于动物细胞培养的组织和细胞大都取自胚胎或出生不久的幼龄动物的器官或组织，其主要原因是这样的组织细胞 （　 ）　　 A.容易产生各种变异 B．具有更强的全能性　 C.取材十分方便 　　 D．分裂增殖的能力强 D 4.动物细胞培养与植物细胞培养的重要区别在于------------------------------（ ） A.培养基不同； B.动物细胞培养不需要在无菌条件下进行； C.动物细胞可以传代培养，而植物细胞不能； D.动物细胞能够大量培养，而植物细胞只能培 养成植株。 A 作业： 1、在动物细胞培养过程中，为什么要用胰蛋白酶对取出的动物组织进行处理？ 胰蛋白酶处理动物组织，可以使动物组织细胞间的胶原纤维和细胞外的其他成分酶解，获得单个细胞，从而使每个细胞都能与培养液充分接触。 2、在动物细胞培养过程中为什么不用胃蛋白酶？ 胰蛋白酶最适PH值为7.2 — 8.4 胃蛋白酶最适PH值为1.5左右 动物细胞培养最适PH值为7.2 — 7.4 3、单克隆抗体制备过程利用了哪些原理？ 免疫原理，细胞融合原理和动物细胞培养原理 4、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合制备单克隆抗体？ 这样融合成的杂交瘤细胞，继承了双亲细胞的遗传物质，不仅具有B细胞分泌抗体的能力，而且还有无限增殖的本领，因而可以获得大量单克隆抗体 * DMEM培养基 胎牛血清 其他成分 锥形瓶逐级放大培养 加碱（碳酸氢钠） 加糖（葡萄糖） 灌注培养液 微载体 5L种子罐培养 培养液 50L 生 物 反 应 器 接种狂犬 病毒 出液口 收获病毒 提问： 植物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 植物组织培养, 植物体细胞杂交 动物细胞工程常用的技术手段有哪些？ 1、选材： 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官，它们细胞增殖能力强，分裂旺盛，分化程度低，容易培养。 在进行动物细胞培养时，用胰蛋白酶分散细胞，说明细胞间的物质主要是蛋白质。动物细胞培养适宜的PH为7.2—7.4，此环境下胃蛋白酶（2.0）没有活性，而胰蛋白酶(7.2-8.4)的活性较高。 2.分散成单个细胞 4.过程： 细胞悬浮液 10代细胞 50代细胞 无限传代 原代培养 传代培养 细胞株 细胞系 5.如何界定原代培养和传代培养；细胞株和细胞系？ 多数组织细胞固定在表面生长和分裂。 随细胞增多，细胞就会停止分裂增殖 遗传物质改变 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 胰蛋白酶 剪碎 单个细胞 加培养液 制成 细胞悬浮液 细胞株 细胞系 细胞增值 无限传代 去掉组织间蛋白 动物细胞培养不能 最终培养成生物体 保证细胞顺利的生长增殖 动物细胞培养液的主要成分： 葡萄糖、氨基酸、无机盐、维生素和动物血清等。 与植物培养基相比其特点是： （1）液体培养基 （