糖的薄层层析.ppt

薄层层析的种类:1 吸附薄层层析：化学结构不同的物质，在同一吸附剂上具有强弱不同的吸附性。薄层层析是利用吸附剂在各种溶剂中对不同化合物的吸附能力的强弱不同而进行分离。如硅胶G、硅胶H氧化铝等都属于此类。2 分配薄层层析：其基本原理与纸层析相同，即由支持剂、固定相、流动相组成整个层析系统。如纤维素、硅藻土等均属于此类。3 离子交换薄层层析：一般采用离子交换纤维素来制作层析薄板。 本实验是以硅胶G为支持物的薄层层析。在铺有吸附剂的薄层上，样品经过连续反复的被吸附剂吸附及展开剂解吸附的过程后，不同的糖因其分子量不同，羟基数目及醛基、酮基性质的差异，故而在薄层上以不同速度移动而得以分离。被吸附剂吸附强及被展开剂解吸附弱的在薄层上移动速度慢，展开距离短；反之则移动速度快，展开距离长，于是混合糖液中的各种糖就被分离开来。糖在薄板上的移动速度是戊糖＞己糖＞双糖＞三糖。 在相同条件下，对照已知糖的Rf值可对未知糖进行定性分析。 三、实验材料、仪器和试剂 1．实验材料和仪器：玻璃板、天平、电热烘箱、电吹风、毛细管、层析缸、喷雾器。 2. 试剂 (1)、1%标准糖溶液：称取木糖、鼠李糖、蔗糖、葡萄糖各100mg ,分别用75%乙醇定容至10ml。 (2)、混合糖溶液：称取木糖、鼠李糖、蔗糖、葡萄糖各1g溶于50ml蒸馏水。 (3)、糖显色剂（苯胺－二苯胺－磷酸显色剂）：称取1g二苯胺，加入1 ml苯胺。待溶解后加入50ml丙酮，最后加入5 ml H3PO4，边滴加边搅拌。此溶液应透明、无浑浊。 (4)、展开剂：用前配制。 1、正丁醇︰乙酸乙酯︰异丙醇︰冰乙酸︰水=2︰6︰6︰4︰1 2、氯仿︰甲醇=60︰40（V/V） (5)、0.02 mol/L 醋酸钠（含有0.5%的CMC-Na）。 四、实验步骤 1、薄板制备：称取硅胶G 1.5g于烧杯中，加入0.02mol/L醋酸钠6ml(含有CMC-Na0.5%），调成均匀糊状后，立即倾于玻璃板上，使糊状物迅速铺平，布满整块玻板。将铺好的硅胶G薄板于100℃烘箱中烘干（30min），取出后即可使用。 2、点样：用毛细管分别吸取4种标准糖溶液及其混合液，在距玻板一段1.5cm处，间距1cm分别点样，用电吹风吹干样点。 3、展开：先在层析缸中放入展开剂，液面不要超过点样线，将硅胶板点样点朝下放入层析溶剂中，将层析缸密闭，待溶剂到达标志线(距玻璃板上缘一厘米处）后取出电吹风吹干。 4、显色：用喷雾器向薄层均匀地喷上糖显色剂，置于80～100℃烘箱烘烤约3～5min，至色斑出现为止。 5、 记录各斑点的位置、颜色，绘出层析图谱。计算各标准糖及混合糖中各组分斑点的Rf值，以鉴定混合糖中糖的组分。移动速率(比移值)： 原点到层析点中心的距离 Rf = 原点到溶剂前沿的距离 五、注意事项 1、 制板时糊状物稀稠合适，铺板迅速，以保证薄板薄而均匀，表面平整。 2、 样品不宜过浓或过稀。 3、 点样点直径≤3mm，样点间距离≥1cm。 4、 用0.02mol/L 醋酸钠（也可用0.02mol/L硼酸）代替水来调制硅胶板，可使Rf值较接近的糖得到更好的分离。 六、思考题： 显色时，是否可以采用其他的糖显色剂？ * * 实验十 糖的薄层层析 学时: 3 一、实验目的 1 掌握吸附层析法。 2 掌握薄层层析的原理和操作技术。 二、实验原理 薄层层析是将吸附剂或支持物均匀地铺在玻璃上成为薄层，然后把要分析的样品加到薄层的一端，用合适的溶剂展开而达到分离目的。按照不同的样品和不同的分离要求可选用不同的支持物，如硅胶G、硅藻土、氧化铝G、纤维素、离子交换纤维素等。 薄层层析的优点是设备简单，操作方便，层析时间短，样品用量范围大（1μg～0.5g），灵敏度高，可以分离多种化合物，显色方法可采用腐蚀性显色剂，其分辨率较高。