5.细菌的生理生化反应.ppt

主要用于厌氧菌的鉴定 产气夹膜梭菌卵磷脂酶阳性 中间类杆菌脂酶阳性 致病性葡萄球菌硷性磷酸酶阳性，如金黄色葡萄球菌等 * 细菌的生理生化反应 生化反应来测定微生物的代谢产物，生化反应常用来鉴别一些在形态和其它方面不易区别的微生物。 糖酵解试验 过氧化氢酶试验 淀粉水解试验 V-P试验 甲基红（Methyl Red）试验 靛基质（Imdole）试验 枸椽酸盐试验： 尿素酶（Urease）试验 硝酸盐还原试验 三糖铁（TSI）琼脂试验 动力试验 API系列 VITEK?全自动化微生物鉴定系统 原理：细菌含有发酵糖（醇、苷）的酶分解糖类产酸、产气、或仅产酸。 培养基：含有0.5% - 1%的糖（醇、苷）的液体、半固体、固体、或微量生化管。 方法： 纯菌种接种培养基，要求的温度，数小时至两周，微量管注意保持湿润，以免干燥。 结果：能分解糖（醇、苷）类产酸时，培养基中的指示剂呈酸性反应。若能产气时，培养基可出现开裂气泡等现象 意义：肠杆菌科尤为重要 根据细菌分解利用糖能力的差异表现出是否产酸产气作为鉴定菌种的依据。是否产酸，可在糖发酵培养基中加入指示剂溴甲酚紫（即B.C.P指示剂，其pH在5.2以下呈黄色，pH在6.8以上呈紫色），经培养后根据指示剂的颜色变化来判断。是否产气，可在发酵培养基中放入倒置杜氏小管观察。 [方法]： 取糖发酵管培养基，此时培养基应呈澄清、紫色，倒立小管内无气泡，接种细菌后置37℃温箱培养18－24小时，观察结果。 [结果]： 1、确定细菌是否生长 2、产酸，则培养基指示剂（溴甲酚紫）变为黄色，以“+”表示。 3、产酸又产气，则培养基除变黄外，在倒置的小管中有气泡，用“　　”表示。 4、不发酵糖类，培养基仍为紫色，小管内无气泡，以“-”表示。 大肠杆菌 伤寒杆菌 副伤寒杆菌 葡萄糖 + 乳糖 - - 葡萄糖： + - 麦芽糖： - + 甘露醇： + - 鼠李糖： - + 原理：细菌分解葡萄糖的过程中，必须有分子氧参加的，称为氧化型；可以进行无氧降解的，称为发酵型；不分解葡萄糖的称为产碱型 培养基：HL二氏培养基 方法：待测菌同时接种两只HL培养基，其中一只滴加无菌的液体石蜡，高度不少于1cm，35℃培养48h或更长 结果：两只均无变化为产碱型；两只均产酸为发酵型；仅不加石蜡的产酸为氧化型 意义：肠杆菌科与非发酵菌的鉴别；葡萄球菌与微球菌的鉴别，前者为发酵型，后者为氧化型 原理：有的细菌可以产生β半乳糖苷酶，分解邻-硝基酚- β半乳糖苷生成黄色的邻-硝基酚 方法：从KIA上取菌，于0.25ML无菌生理盐水中制菌悬液，加甲苯一滴，使酶释放。37 ℃水浴5min,加0.25mlONPG试剂，水浴20min-3h观察结果 结果：呈现黄色为阳性，一般20-30min内显色 意义：迅速及迟缓发酵乳糖的细菌为阳性，不发酵乳糖的细菌为阴性。本试验主要用于迟缓发酵乳糖的细菌的快速鉴 注意：该试验不一定与分解乳糖相一致，决定于细菌产生的酶及其活性 原理：有的细菌可将七叶苷分解成葡萄糖和七叶素，后者与培养基中的枸橼酸铁的二价铁离子反应生成黑色化合物，使培养基呈黑色 方法：将待测菌接种于七叶苷培养基，培养后观察结果 结果：培养基变黑为阳性，不变为阴性 意义：D群链球菌与其他链球菌的区别， 前者为阳性；肺炎克雷伯、阴沟肠杆菌多 阳性 + - 原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者进一步生成甲酸、乙酸、乳酸等，使培养基的PH降至4.5以下，加入甲基红试剂后显红色即阳性。若产酸量少，或进一步转化为其他物质，则培养基的PH仍在6.2以上，加入甲基红试剂后显黄色，为阴性 培养基：葡萄糖蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，2-4天后， 加入甲基红试剂，观察结果 结果：呈现红色为阳性，橘红色为弱阳 性，黄色为阴性 意义：大肠、沙门、志贺、变形、枸橼酸 杆菌、等为阳性；肠杆菌属、哈夫尼亚菌属为阴性 原理：细菌分解葡萄糖产生丙酮酸，后者脱羧产生乙酰甲基甲醇，乙酰甲基甲醇在碱性环境中被氧化为二乙酰，进而与培养基中蛋白胨内精氨酸中的胍基作用，生成红色化合物，即为V-P试验阳性。α奈酚可加速此反应 培养基：葡萄糖蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，35 ℃ 48h，加入甲液（6%α奈酚酒精溶液） 和乙液（40 %KOH溶液） 结果：20min内出现红色为阳性，如 无红色，且于35 ℃4h 后仍如故即为 阴性 意义：本试验常与甲基红一起试验，前者阳性则后者多阴性 原理：某些细菌具有色氨酸酶，能分解蛋白胨水中的色氨酸产生吲哚，当加入吲哚试剂-柯氏试剂（对二氨基苯甲醛）后则形成红色的玫瑰吲哚 培养基：蛋白胨水 方法：待测菌接种于培养基，3