1-基因组DNA的提取及电泳鉴定.ppt

如果是Smear带，说明所提基因组DNA的断裂现象严重。 1 2 3 4 5 marker 未酶切的基因组 思考题： 1. 本实验中所用到的各试剂的作用是什么? 蛋白酶K, SDS, TE 饱和酚，氯仿, 乙醇, EDTA 2. DNA提取过程中有哪些注意事项？ 实验结束后整理实验台, 值日生值日! * 8:00~8:05 * 实验仪器的使用及注意事项 ：（1：25~1：30） * * （1）吸头的安装要紧密：（2）吸取液体前，先打到第一挡：第一挡为实际读数体积，第二挡为帮助彻底打出液体，避免吸头内液体残留。 （3）将吸头插入液面下，不易过深或过浅：（4）缓慢松开拇指，吸取液体。（5）完全放开拇指后，吸头在液面下停留一下（约半秒钟）：（6）抬起加样器，观察吸头外壁上是否挂有液体。将外壁液体用容器口引流回容器： 尤其国产吸头容易沾附液体。 （7）将液体匀速打到目的容器内，加样器推到第二挡：速度不易过快。 （8）取下加样器头，放到废物盒内。如果需要吸取相同液体，吸头没有被其他试剂污染，可不换吸头。 * 按箭头所示，讲解离心机使用程序： * 简单介绍一下真核细胞和真核细胞基因组，及我们今天实验的几部分内容（模板DNA的提取、电泳） * 置50°C水浴50分钟讲解：但以2价离子镁氯化镁的沉淀效率最高，还能提供Mg2+稳定DNA。 * 实验第二部分（2：50~3：30） 实验前讲解： 1）本实验将用到的TE饱和重蒸苯酚、氯仿/异戊醇是有机试剂，比水的比重大，而DNA溶解在水里，达到分离DNA和杂质的目的； 2）介绍实验步骤； 3）强调注意事项（不能将加样器倒置，以防液体导流损坏加样器：尤其在抽取氯仿、苯酚等有机试剂时）。 1）? 模板DNA由于太大，非常容易受机械剪切而断裂，因此，为了得到完整的基因组DNA，尽量不要多次进行物理性操作，如用加样器反复吹打等，有时需要将加样器头尖剪断，以防由于太细造成基因组DNA通过狭小通道而断裂。 实验中到学生中间指导实验。 * 注意事项：教师在实验中到学生中间指导实验。 * 步骤8）时注意：完整基因组DNA有一个物理特性，就是比较粘，因此，如果基因组DNA黏度还在，一般情况下可以认为完整性尚可。 * 哺乳动物DNA的分离通常是在有EDTA及SDS一类的去污剂存在下用蛋白酶K消化细胞．随后用酚抽提而实现的。低分子量杂质则用透析法加以去除。这一方法获得的DNA，其大小(100—150kb)适用于Southern分析和用噬菌体构建基因组DNA文库。 然而，若要用粘粒成功地构建文库则要求更大的DNA。 —端受到剪切而另一端则由限制酶切割产生的DNA片段，可在连接反应中争夺粘粒DNA，从而有效地阻碍了可被包装进曙菌体颗粒的多联体的形成。为避免出现这—问题，初始DNA的长度需数倍于用来构建文库的部分酶切产物。图9．2表示两端均适于克隆的部分消化产物所占组分与基因组DNA的初始长度的相互关系。DNA初始长度应至少是用于克隆的片段的4倍，否则生成的有效片段相对较少。因此，用就粒构建基因组DNA文库，初始DNA的长度应大干200kb。对于涉及有机溶剂抽提和机械剪切作用的方法来说，分离这样大小的DNA片段是困难的，因为在这些步骤里，DNA发生大量丢失。 ，实时PCR可以定量分析基因的拷贝数,等等 * 要。 * 实验第 部分：60~80分钟。（3：30~4：00） * * 小图为教师做的予实验结果。由于在一个反应体系中有很多条基因组DNA，因此，理论上说，内切酶可以切割出相差一个碱基的DNA片段。 本次实验使用未经酶切的DNA样品电泳，由于片段大，在加样孔附近可看到一条很亮的DNA带。 * 小图为教师做的予实验结果。由于在一个反应体系中有很多条基因组DNA，因此，理论上说，内切酶可以切割出相差一个碱基的DNA片段。 本次实验使用未经酶切的DNA样品电泳，由于片段大，在加样孔附近可看到一条很亮的DNA带。 分子生物学实验 1、 欢迎大家参加分生实验的学习； 2、 学习分生实验的重要性； 3、 守纪律，听老师安排，穿白衣； 4、 每组做一份实验 4、 本课件原则上禁止拷贝，要作好记录; 5、 关于课间休息和上课时间 每天实验结束应主动整理实验台。值日安排。 实验课考试 1. 最后2学时进行实验课考试 2. 开卷, 内容为实验课学习内容。 ?一、加样器的使用及注意事项 1、 用途 2、 如何使用？ 2.1 根据取样量，选择合适的加样器。 5ul、50ul、500ul，应选择哪个加样器? 顶部标有加样器的最大量程， 分别为： 20ul: