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动物乳腺反应器 是指利用动物乳腺特异性启动子调控元件指导外源基因在乳腺中特异性表达,并能从转基因动物乳汁中获取重组蛋白的一种生物反应器。 特点: 1.对转基因动物的影响小 2.产量大,产品易提纯,质量高 3.表达产物生物活性稳定 4.易于扩群,进行规模化生产 5.缩短新药上市周期 6.可以获取巨额经济利润 (四)基因治疗 1.基因治疗(gene therapy) 是指将外源功能性目的基因导入病人体内,通过调控目的基囚表达,抑制、替代或补偿缺陷基囚,从而恢复细胞、组织或器官的生理功能,达到疾病治疗目的的一种方法 2.治疗方式: (1)基因直接注射法(in vivo): 即经静脉或肌肉直接将带存外源DNA的病毒、脂质体或裸露的DNA注入患者有关组织,使其进入相应的细胞并表达。 (2)体外基因转移再回输体内的方法(ex vivo): 即将患者的体细胞(如T淋巴细胞)取出在体外培养并导入外源目的基因后重新输回患者体内。 3.基因治疗的策略 (1)基因置换 (2)基因补偿 (3)基因失活 (4)免疫基因治疗 (5)活化前体药物基因治疗 (6)耐药基因治疗 (五)RNAi技术 The Nobel Prize in Physiology or Medicine 2006 RNAi 一、RNAi早期研究和理论形成 二、参与RNAi的重要分子 三、 RNAi作用机制 一 、 RNAi早期研究和理论形成 (一)、RNAi早期研究 1、牵牛花实验 1990年,Arizona大学的Rich教授在转基因实验室将紫色素基因导入至矮牵牛花植物,目的是想通过增加紫色素基因拷贝获得具有更多的紫红色的矮牵牛。结果出乎意外,增加花瓣紫色的着色失败,一些转基因的花出现全白或部分白花,色素合成不是增加了,而是减少了,事实上,不仅导入的基因未被表达,反而植物本身的基因也失活或受到某种程度的限制。这种现象称为共抑制(cosuppression)现象。 * 山西医科大学生化教研室 * 2.秀丽线虫实验 1995年,Cornell大学Su Guo和Kemphues试图以反义RNA技术特异性地阻断秀丽线虫par-1基因的表达以研究其功能。发现,给线虫注射par-1的反义RNA时,如预期那样阻断了该基因的表达;但当给对照组注射正义RNA以期观察到该基因表达增强时,却发现par-1基因同样也被抑制了。 3.粗糙脉孢菌实验 1997年,意大利Cogoni等,将外源类胡萝卜素基因导入真菌粗糙脉孢菌(结果引起30%被转化的脉孢自身基因失活,转化细胞中内源性胡萝卜素基因也受到了抑制,这种基因失活形式称之为抑制( quelling, 基因压制)。 早期的三个实验,牵牛花实验和粗糙脉孢菌实验已经做出了有意义的结果,但都没有继续研究。 其中以秀丽线虫实验有最有意义,因为在这个实验中给线虫注射了正义RNA和反义RNA,但就是没有注射二者结合起来的双连RNA。而RNAi理论形成的形成正是基于后者。 (二)RNAi理论形成 1. RNAi理论 2. RNAi概念 Discovery of RNAi Double-stranded RNA inject C. elegans Neg. control Uninjected Antisense RNA dsRNA sense antisense Nature 1998, 391:806-811 Mex-3 mRNA detection in embryos by in situ hybridization 1.RNAi理论 1998年,Fire和Mello运用asRNA、sRNA及dsRNA进行研究,结果非常令人吃惊,在使相应的C.elegans基因沉默上, dsRNA 的抑制效能比单一的有义或反义均有效,诱导基因沉默的效率高10倍。少量的dsRNA处理线虫就能呈现基因沉默现象,该抑制现象还可传给第二代。 2. RNAi概念 RNAi是指一些小的双链RNA序列导入机体或细胞中,机体或细胞中与之有同源序列的基因的表达将会受到高效特异的抑制或阻断(沉默),因为RNAi作用发生在转录后水平,所以又被称为转录后基因沉默(post-transcriptional gene silencing, PTGS) 二.参与RAN干扰的重要分子 (一)Dicer酶 (二)RISC (三)RdRP和mR
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