脂肪酶检测试剂盒DLPS-100.doc

PAGE PAGE 1/1页 脂肪酶测试盒(DLPS-100) QuantiChromTM Lipase Assay Kit 产品说明 脂肪酶可催化水解脂类中甘油主链上的酯键。在人体消化系统中分解脂肪的关键酶是胰脂肪酶，它可将脂肪中甘油三酯分解为甘油一酯与游离脂肪酸。人体的胰脂肪酶和与之相关的蛋白2，主要是由胰腺分泌的。急性胰腺炎发作时，脂肪酶含量可在24到48小时内上升5到10倍。脂肪酶活性的增强可能与胰管阻塞、胰腺癌、肾脏疾病、唾液腺炎症、肠梗阻和其他胰腺疾病等有关。脂肪酶活性不足则可能是因为胰腺中分泌脂肪酶的细胞遭受了永久性的损伤。 方便、直接、自动化的脂肪酶活性检测手段是非常理想的。本公司研制的脂肪酶检测试剂盒使用改良的BALB法，通过脂肪酶裂解BALB得到含有巯基的产物，并将该产物与二硫基双(硝基苯甲酸)反应生成黄色物质，在波长为412nm下检测，其颜色强度与样本的酶活性成正比。 适用范围 直接检测血清、血浆、唾液，尿液以及其它生物样本中的脂肪酶活性。 产品特点 灵敏、准确：96孔板测试中，其检测范围在40 - 1600 U/L之间。 简便、高通量： 整个检测过程只需加入一种工作试剂，在室温或37℃下，分别于10分钟和20分钟时读取吸光度即可。每天可自动测试上千份样本。 试剂盒组成(96孔板供100份测试) 缓冲液(pH 8.5)：15 mL 染色剂：530 mg BALB试剂： 1 mL 校准液：2 mL（相当于735U/L） 储藏条件：可在室温下运输。试剂4℃保存 预防措施：本产品仅供研究用。使用过程中应严格遵循实验安全措施。 检测步骤 样本制备: 脂肪酶抑制剂(EDTA与某些去污剂，如Tween-20和NP-40)，巯基乙醇以及二硫苏糖醇会干扰检测结果，样本应避免这类干扰物。样本可冰冻保存1个月。组织和细胞萃取液可用冷PBS缓冲液匀浆并通过离心(14000rpm离心5分钟)来获得。 工作试剂：需现用现配， 配好的工作试剂须在1小时内使用。将染色剂加入缓冲液中并混合摇匀，再加入0.8 mL BALB试剂(可供100份样本使用)。如根据需求量现配，则可按每孔5 mg染色剂、140 μL缓冲液、8 μL BALB试剂的比例配置。 备注：该检测基于动力学反应，工作试剂的加入需快速，推荐使用多管移液器。 1. 取透明平底96孔板， 在两个孔内分别加入150 μL H2O和150 μL校准液。吸取10 μL样本加入另外的孔中， 并在样本孔加入140 μL的工作试剂。轻拍使溶液混合。 备注：如检测需在其它温度（如37℃）条件下进行，那么在检测开始前应当提前将工作试剂加热到该温度。 2. 分别在反应10分钟(OD10min)与20分钟(OD20min)时读取OD412nm值. 酶活性计算： OD20min和OD10min分别为样本于20分钟和10分钟时的OD412nm值。OD校准液 和ODH2O为校准液与水在20分钟时的OD412nm值。735是测试条件下校准液的等值活性(U/L)。 备注：如果计算得到的活性高于1600 U/L，用PBS稀释样本并重复测试，结果需乘以稀释倍数(n)。 单位定义：测试条件下(pH 8.5)，一单位酶每分钟可以催化裂解1 μmole的底物。 实验必需品(未提供) 吸液用仪器(多管)，透明平底96孔板，微孔板分析仪。 使用比色皿检测 若检测使用1 mL标准比色皿，需用1 mL H2O和1 mL校准液。反应体积为：60 μL样本+940 μL工作试剂。 96孔板检测标准曲线 参考文献 [1]. Furukawa, I. et al (1982). Assays of serum lipase by the BALB-DTNB method mechanized for use with discrete and continuous-flow analyzers. Clin Chem. 28: 110-113. [2]. Lombard, S. et al (2001). Lipolytic activity of ricin from Ricinus sanguineus and Ricinus communis on neutral lipids. Biochem J. 358: 773–781. [3]. Kurooka S. and Kitamura T. (1978). Properties of serum lipase in patients with various pancreatic diseases. Analysis by a new serum lipase assay method (the BALB-DTNB