热带假丝酵母固体发酵代谢物提取方法的比较分析-动物营养学报.pdf

动物营养学报２０１２，２４（８）：１６１０１６１４ ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｎｉｍａｌＮｕｔｒｉｔｉｏｎ 　 ｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００６２６７ｘ．２０１２．０８．０２８ 热带假丝酵母固体发酵代谢物提取方法的比较分析 １ １ １ ２ ２ 聂存喜 　张文举 　闫理东 　蒋粒薪 　马贵军 （１．石河子大学动物科技学院，石河子 ８３２００３；２．新疆天康畜牧生物技术股份有限公司 生物添加剂分公司，乌鲁木齐 ８３００１１） 摘　要：本试验比较了几种提取微生物固体发酵代谢物的方法，旨在筛选出一种尽可能多保留 了代谢物的方法。试验采用热带假丝酵母固体发酵棉粕源底物，以液相色谱串联质谱（ＬＣＭＳ） 为分析平台，分别采用５０％冷甲醇溶液（甲醇法）、酸性甲醇－乙腈溶液（酸性甲醇－乙腈法）和 ５０％乙腈溶液（乙腈法）提取发酵代谢物。结果表明：采用酸性甲醇－乙腈法、乙腈法和甲醇法 分别提取出１８３１、１５２２和１２６２种代谢物，提取效率表现为酸性甲醇－乙腈法＞甲醇法＞乙腈 法。本试验中３种方法相比，酸性甲醇－乙腈法提取的代谢物种类最多，提取效率最佳，是微生 物固体发酵代谢物提取的有效方法。 关键词：热带假丝酵母；固体发酵；发酵饲料；代谢物；提取方法 中图分类号：Ｓ８１６．３　　　　文献标识码：Ａ　　　　文章编号：１００６２６７Ｘ（２０１２）０８１６１００５ 　　微生物代谢组学（ｍｉｃｒｏｂｉａｌｍｅｔａｂｏｌｏｍｉｃｓ）是 对某一时刻微生物生化网络中涉及的所有胞内、 １　材料与方法 胞外有生物活性小分子代谢物进行鉴定和定量分 １．１　仪器与试剂 ［１］ 析的一门科学 ，在微生物发酵饲料代谢组学分 　　仪器：Ｕｌｔｉｍａｔｅ３０００ＨＰＬＣ高效液相色谱仪 析过程中要尽可能多的保留代谢物，这就需要一 （美国Ｄｉｏｎｅｘ公司）、３２００ＱＴＲＡＰ液质联用仪 种良好的提取方法。目前，代谢物的提取溶剂主 （美国ＡｐｐｌｉｅｄＢｉｏｓｙｓｔｅｍｓ公司）、高速冷冻离心机 要有冷 甲醇 （ＭｅＯＨ）、热 甲醇、高氯酸、乙腈 （日本Ｈｉｔａｃｈｉ公司）、隔水式恒温培养箱（上海博 （ＭｅＣＮ）、碱等［２－５］，基于这些溶剂的方法多数是 迅）、电热恒温水浴锅（上海精宏）、超低温冰箱 针对细胞内或细胞外代谢物的提取，对于固体发 （美国Ｔｈｅｒｍｏ公司）。 ［６］ 酵代谢物的提取方法报道较少 ，且未见固体发 　　试剂：甲醇、甲酸和乙腈（均为美国ＦｉｓｈｅｒＳｃｉ 酵饲料的代谢物提取方法的报道。其中酸碱溶剂 ｅｎｔｉｆｉｃ公司，色谱纯）；超纯水由纯水机制备。 在提取过程中受到中和过多酸碱产生沉淀的影响 １．２　提取溶剂 而提取效率较低，有机溶剂提取效果相对较好，多 　　提取溶剂为５０％冷甲醇溶液（甲醇法）、酸性 采用甲醇和乙腈溶液。固体发酵饲料因其底物的 甲醇－乙腈（ＡＭＦ）溶液（甲醇∶乙腈∶水体积比为 复杂性，以及发酵饲料胞内、胞外均存在影响动物 ２∶２∶１，甲酸 ０．１ｍｏｌ／Ｌ，酸性甲醇 －乙腈法）和 生长、发育的物质，对其进行代谢组学的研究提取 ５０％乙腈溶液（乙腈法）。 方法是关键。因此，本文以液相色谱串联质谱 １．３　菌株与发酵过程 （ＬＳＭＳ）为平台，比较了３种方法提取热带假丝 　　菌株：热带假丝酵母ＺＤ３，由浙江大学饲料科 酵母固体发酵代谢物的效果，以为微生物代谢组 学研究所选育和提供。 学研究方法提供参考。