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/e1010121 DOI:10.21769/BioProtoc.1010121
水稻组蛋白抽提
Histone Extraction from Rice
陈香嵩,周少立,宗伟,赵毓*
作物遗传改良国家重点实验室,华中农业大学,武汉
*通讯作者邮箱:zhaoyu@
引用格式:陈香嵩,周少立,宗伟,赵毓. (2018). 水稻组蛋白抽提. Bio-101 e1010121. Doi:
10.21769/BioProtoc.1010121.
How to cite: Chen, X. S., Zhou, S. L., Zong, W. and Zhao, Y. (2018). Histone extraction from rice. Bio-
101 e1010121. Doi: 10.21769/BioProtoc.1010121. (in Chinese)
实验原理:组蛋白是一类碱性蛋白,且分子量很小,这里介绍的组蛋白抽提方法不能
得到非常纯的组蛋白,只是相对富集分子量较小的碱性蛋白,但是基本能满足一般的
实验要求。
关键词:组蛋白,三氯乙酸,水稻
材料与试剂
1. 1.5 ml 进口离心管
2. 50 ml 离心管
3. 各种型号枪头 (20 μl, 200 μl, 1 ml)
4. Miracloth (Calbiochem, catalog number: 475855)
5. Protease Inhibitor (Roche, catalog number: 11836153001)
6. 水稻样品
7. 液氮
8. 三氯乙酸 (国药集团)
9. 丙酮 (国药集团)
10. EDTA
11. HCl
12. DTT (Sigma, catalog number: D0632)
13. 组蛋白抽提缓冲液 (见溶液配方)
Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 1
/e1010121 DOI:10.21769/BioProtoc.1010121
14. 100%三氯乙酸 (见溶液配方)
仪器设备
1. 移液枪
2. 量筒
3. 超净工作台
4. 通风橱
5. 天平
6. 干浴锅
7. 高速冷冻离心机
实验步骤
1. 取50 ml 离心管,加入20 ml 预冷的组蛋白抽提缓冲液,置于冰上待用。
2. 液氮研磨样品,取 2 g 粉末加入到抽提缓冲液中,充分混匀,用单层的 Miracloth
(Calbiochem)过滤掉残渣 (视频1)。
视频1. 样品匀浆后单层Miracloth 过滤
3. 4 度冷冻离心,12,000 x g 离心10 分钟。
4. 取16 ml 上清于另一离心管中,加入4 ml 的100%三氯乙酸 (视频2) 。
Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC. 2
/e1010121 DOI:10.21769/BioProtoc.1010121
视频2. 样品上清转移及三氯乙酸沉淀蛋白
5. 混匀后17,000 x g 冷冻离心30 分钟 (转速较高,注意选择进口的离心管)。
6. 弃上清,用1 ml 左右-20 °C 预冷的丙酮洗涤沉淀 (管壁上也有一层乳白色的沉淀,
注意一并洗下,避免丢失) 并转移到1.5 ml 进口离心管中 (视频3)。
视频3. 丙酮沉淀蛋白
7. 12,000 rpm 冷冻离心10 分钟,弃上清。
8. 重复步骤6、7 两次,每次洗涤时要注意把沉淀彻底打碎,重悬沉淀。
9. 弃上清,置于超净台吹干或通风橱中让丙酮挥发至沉淀如粉状。
10. 加入适量1x Laemmli buffer (一般2 g 样品对应200-300 μl),室温溶解过夜 (视频
4) 。
Copyright © 2018 The Authors; exclusive licensee Bio-protocol LLC.
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