第五章病毒的检测.ppt

* * 第六章 病毒的检测 第一节 病毒的分离与鉴定 第二节 病毒感染单位的测定 第三节 病毒颗粒的检测 第四节 病毒的血清学检测 第一节 病毒的分离与鉴定 病毒的分离与鉴定包括：病毒材料的采集与准备、病毒的分离与培养、病毒的形态学观察、病毒的理化特性测定、病毒的血清学鉴定及病毒的分子学鉴定等基本过程。 病料的采集与准备 发病或死亡动物的组织病料、分泌物或粪便等 采集样本在接种细胞、鸡胚或动物之前，都需要作适当的处理，以保证病毒分离的成功机率 病毒的分离与培养 细胞培养、鸡胚和实验动物可用于病毒的分离与培养 病毒的理化特性测定 核酸型鉴定、耐酸性试验、脂溶剂敏感性试验、耐热性试验、胰蛋白酶敏感试验 病毒的血清学及分子生物学鉴定 第二节 病毒感染单位的测定 荧光-斑点试验（Fluorescent-focus assay） 空斑试验 转化试验（Transformation assay） 用于测定某些不形成空斑的反转录病毒的滴度。Rous肉瘤病毒转化鸡胚细胞就是一个例子。受到转化的细胞可形成小的斑点，容易与其余的单层细胞相区别。感染性以每毫升斑点形成单位（Focus-forming unit，FFU）表示 终点稀释法 终点稀释法（Endpoint dilution assay） 用于测定几乎所有种类的病毒滴度，包括某些不能形成空斑的病毒，并可用以确定病毒对动物的毒力或毒价。 接种一定数量的细胞、鸡胚或动物。使用细胞培养，可通过CPE来判定组织培养半数感染量（TCID50）。在鸡胚或动物，是以死亡或发病来测定。以感染发病作为指标时，可计算半数感染量（ID50）；以体温反应作指标时，可计算半数反应量（RD50）。用鸡胚测定时，可计算鸡胚半数致死量（ELD50）或鸡胚半数感染量（EID50）。 第三节 病毒颗粒的检测 电子显微镜技术 电子显微镜（Electron microscopy，EM）是观察病毒颗粒最直观的方法 直接负染，或超薄切片后再作负染观察 免疫电镜（Immunoelectron Microcopy,IEM） 应用病毒的特异抗体的电镜技术。 血凝试验（Hemagglutination assay） 第四节 血清学检测 中和试验、免疫染色技术、免疫沉淀技术、免疫转印技术和酶联免疫吸附试验（ELISA）等 病毒中和试验（Virus neutralization） 病毒的一些蛋白质抗原或抗原表位的抗体与病毒结合后可以中和病毒的感染性。 病毒中和试验可以在细胞培养、鸡胚或动物上进行，检测其在细胞培养、鸡胚或动物上的残余感染性。终点是以抑制细胞病变（细胞培养）或病毒复制（鸡胚或动物）的抗体最高稀释度来表示。特异性强， 是检测病毒和新分离病毒毒株的鉴定最经典的方法，也可用于检测病毒感染动物血清中的抗体 血凝抑制试验（Hemagglutination inhibition） 针对具有血凝活性病毒的抗体可阻断病毒与红细胞的结合。利用血凝抑制试验可以检测和鉴定具有血凝特性的病毒，例如流感病毒。 该方法敏感、简单、费用低，而且操作简便。也可用于检测动物血清中的血凝抑制抗体。 病毒蛋白检测（Viral protein detection） 病毒抗体可以用于检测感染细胞或组织中的病毒蛋白。可采用免疫染色技术如免疫荧光抗体技术、免疫酶染色技术，主要有直接免疫染色和间接免疫染色方法 免疫染色检测病毒示意图 *