凋亡抑制蛋白基因dsRNA转基因烟草表达载体构建.docx

凋亡抑制蛋白基因dsRNA转基因烟草表达载体构建 摘 要：为了利用RNA干扰技术防治烟粉虱，需要 构建凋亡抑制蛋白（IAP）基因dsRNA转基因烟草表达载体。 利用PCR技术扩增烟粉虱IAP基因，将其连接到pMD18-T载 体中，用Bgl II. Xhol和BamH I . Sal I分别酶切，将获得 的片段分别反向、正向连接至pUC-RNAi载体，用PstI酶切 pUC-RNAi-IAP ,回收酶切片段，将其连接到表达载体 PCAMBIA-2300-35S中，并进行酶切验证。IAP dsRNA转基 因烟草表达载体的成功构建为下一步转基因烟草防治烟粉 虱的研究奠定基础。 关键词：凋亡抑制蛋白；dsRNA；转基因烟草；RNA干扰; 烟粉虱 中图分类号：Q782 文献 标识码：A DOI 编码：10. 3969/j. issn. 1006 -6500. 2013.01.002 Construetion of Transgenic Tobacco Plant Vector for Inhibitor of Apoptosis Protein Gene dsRNA GUO Qiang, CHU Dong, FAN Zhong-xue (Shandong Provincial Key Laboratory of  Ecology andCrop Genetic Improvement , Ecology and Physiology, High—tech Research Center, Shandong Academy of Agricultural Sciences , Ji，nan , Shandong 250100, China) PMD18-T ,digested PMD18-T , digested BamHI/Sall respectively, fragments to pUC-RNAi PstI , and cloned with Bglll/Xhol or conducted the acquired vector, digested with into the vec tor A b s trac t： To contol Bemisia tabaci by RNAi , transgenic tobacco plant vector for inhibitor of apoptosis protein (IAP) gene dsRNA should be constructed. In this study, we amplified the IAP gene of Bemisia tabaci by PCR , inserted it into pCAMBIA—2300—35S? Transgenic tobacco plant vector was conf irmed by PstI digesting? The construetion of transgenic tobacco plant vector for IAP dsRNA would lay the foundation for the following study of pes t control. Key words： inhibitor of apoptosis protein； dsRNA ； transgenic tobacco plant ； RNA interference； Bemisia tabaci 烟粉虱Bemisia tabaci (Gennadius)广泛分布于全球 除南极洲外的各大洲，是热带、亚热带及相邻温带地区棉花、 蔬菜和园林花卉等植物及大田作物的主要害虫之一［1］。它 不仅取食寄主植物汁液，而且能够传播100多种病毒，分泌 大量蜜露诱发煤污病影响光合作用［2-3］ o烟粉虱也是科技 界有史以来唯一被冠以超级害虫” (superbug)的昆虫， 近20年来给许多国家的农业造成严重的经济损失。烟粉虱 在我国广大地区已暴发成灾并造成严重危害，近年来烟粉虱 传播的双生病毒在山东、浙江、江苏等地区给番茄等蔬菜造 成毁灭性的危害［4］。现在控制烟粉虱的主要手段为化学防 治。化学农药的大量使用，不仅导致农药残留，破坏了环境 与生态系统平衡，而且导致烟粉虱抗药性逐年增强。目前， 传统的烟粉虱防治策略难以满足农业生产的需要，急需新的 防控手段。 RNA干扰(RNA interference, RNAi)是由与靶基因序 列同源的双链RNA(dsRNA)介导的特异性基因表达沉默现象, 是生物的一种古老并且进化上高度保守的基因表达调节机 制。Fire等［5］ ( 1998 )首次发现将dsRNA注入线虫 Caenorhabdi