生鲜乳中革皮水解物L-羟脯氨酸的快速测定-陕西质量技术监督局.doc

NY ××××—×××× NY ××××—×××× PAGE PAGE 1 陕西省技术监督局 发布××-××-××实施×× 陕西省技术监督局 发布 ××-××-××实施 ××-××-××发布 生鲜乳中革皮水解物（L-羟脯氨酸）的快速测定 酶标仪法 （征求意见稿） DB61/T ××××—×××× 陕西省地方标准 ICS DB 农业部××号公告—××—×××× DB 61/T ××××—×××× PAGE II PAGE II 前 言 本标准按照GB/T 1.1-2009给出的规则起草。 本标准的某些内容可能涉及专利，本标准的发布机构不承担识别这些专利的责任。 本标准由陕西省技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：陕西秦云农产品检验检测有限公司，农业部饲料质量监督检验测试中心（西安） 本标准主要起草人： 赵彩会 高勤叶 李胜 李宏 汪军明 贾青 崔小叶 王佳 贺习文 张晓英 霍艳杰 郝鹏永 本标准为首次发布。 PAGE 6 PAGE 1 生鲜乳中革皮水解物（L-羟脯氨酸）的快速测定 酶标仪法 范围 本标准规定了生鲜乳中革皮水解物（L-羟脯氨酸）的测定方法。 本标准适用于革皮水解物（L-羟脯氨酸）的测定。 本标准的检出限为20 mg/L。 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其必威体育精装版版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 NY/T 3130-2017 生乳中L-羟脯氨酸的测定 原理 试样经盐酸水解，游离出的L-羟脯氨酸经氯胺T氧化，生成含有吡咯环的氧化物。生成物与对二甲氨基苯甲醛反应生成红色化合物，在波长560nm处测定测吸光度，与标准系列比较定性和半定量。 试剂或材料 除非另有规定，仅使用分析纯试剂，实验室用水符合GB/T 6682三级水的规定。。 4.1 盐酸（HCl）：含量36%~38%，优级纯。 4.2 盐酸溶液（0.02 mol/L）：吸取1.8 mL盐酸（4.1）， 用水定容至1L，混匀。 4.3 氢氧化钠溶液（2.3 mol/L）：称取9.2 g氢氧化钠（NaOH），用水溶解并定容至100 mL，混匀。 4.4 缓冲溶液：称取50 g柠檬酸(C6H8O7·H2O)、26.3 g氢氧化钠和146.1 g乙酸钠(NaO2C2H3·3H2O)加水溶解，稀释至1 L，再依次加入200mL水和300mL正丙醇（C3H7OH）混合。 4.5 氯胺T溶液：将1.41g氯胺T（C7H7ClNNaO2S·3H2O）溶于10 mL水中，依次加入10 mL正丙醇和80 mL缓冲溶液（4.4），混匀。现用现配(10 mL足够96孔用)。 4.6 显色剂：称取10.0 g对二甲氨基苯甲醛(C9H11NO)，用35 mL高氯酸(HClO4)溶解，缓慢加入65 mL异丙醇[(CH3)2CHOH]，混匀，现用现配(10 mL足够96孔用) 。 4.7 L-羟脯氨酸标准储备液（1.0 mg/mL）：准确称取100.00 mg L-羟脯氨酸标准品（C5H9NO3，CAS:51-35-4，纯度≥99.0%），用0.02 mol/L盐酸溶液（4.2）溶解并定容至100 mL，混匀，此溶液浓度为1.0 mg/mL。于4 ℃冰箱内储存，有效期6个月。 4.8 标准中间液（50 ug/mL）：准确吸取标准储备液5.00 mL于100 mL 容量瓶中，用0.02 mol/L盐酸溶液定容，混匀，此溶液浓度为50 ug/mL。现用现配。 5 仪器设备 5.1 酶标分析仪（配置560 nm滤光片）。 5.2 恒温干燥箱（RT+10℃~250℃）。 5.3 具盖螺纹口试管（规格：10 mL，耐高温110±1 ℃）。 5.4 可拆的96孔酶标板（空白板）。 6 试验步骤 6.1 提取 准确吸取生鲜乳试样2.00 mL置于水解管（5.3）中，加盐酸（4.1） 2.00 mL，盖紧盖子。放入恒温干燥箱内于110 ℃水解6～12 h，取出，打开水解管，将水解液经滤纸过滤到50 mL容量瓶中，用少许蒸馏水反复冲洗水解管和滤纸，洗液并入滤液中，加入10.00 mL氢氧化钠溶液（4.3），确保溶液 pH值在4～9范围内，用水定容，混匀，待测。同时做空白和质控样品。 6.2 标准曲线的制备 准确吸取标准中间液（4.8）0.00 mL、1.00 mL、2.00 mL、3.00 mL、4.00mL 、