认知侵袭性真菌感染的试验室诊断.ppt

认知侵袭性真菌感染的实验室诊断 汇报人 杨烨建 何为侵袭性真菌感染? IFI诊断依据 常见IFI病原的诊断 组织病理中的隐球菌（PAS） 墨汁染色中的隐球菌 隐球菌性脑膜炎诊断 脑脊液检查 墨汁涂片 培养 动物接种 电镜观察 荚膜抗原乳胶凝集试验（LAT） 分子生物学的方法 涂片和培养对于诊断具有决定意义 直接墨汁涂片 阳性率大约为60% 优点：快速简便、可做菌体计数 当脑脊液中的菌体数较少 （低于103/mm3 ）常常会有假阴性结果，需要做进一步的检查 真菌培养 对本病的诊断有决定意义，是确诊的金标准 诊断的敏感性高于直接真菌涂片 脑脊液真菌培养的方法，对于培养的结果具有重要的影响 荚膜抗原乳胶凝集实验（LAT） LAT是以高效价的抗隐球菌荚膜多糖抗体吸附于标准大小的乳胶上，检测血清或CSF标本中的隐球菌荚膜抗原。 特异性接近100%，敏感性约为95% 与菌体计数具有平行性，对于预后判断有帮助 申克氏孢子丝菌镜下特征 纤细分支分隔菌丝 直角分枝的分生孢子梗，顶端梨形或圆形小分生孢子，呈“梅花瓣样”结构 有的小分生孢子沿菌丝两侧排列，呈“袖套状” 酵母相镜下可见革兰阳性卵圆形或梭形孢子 马尔尼菲青霉鉴定依据 双相菌 直接或病理检查找到腊肠形孢子 菌落特征（培养基被染成红色）和镜下结构（帚状枝及孢间连体） 在察氏培养基上生长不良（麦芽汁培养基上生长良好） 菌丝相 酵母相 菌丝相(正面) 菌丝相(反面) 马尔尼菲青霉 腊肠形孢子 介绍两个实验 GM试验 G试验 IC和IA的相关血清学研究 分离提取白念珠菌烯醇化酶 基因工程制备白念珠菌烯醇化酶 动物模型考察侵袭性白念珠菌感染后抗体产生规律 制备烯醇化酶单克隆和多克隆抗体 蛋白质组学技术筛选烟曲霉优势抗原 巢式PCR技术检测烟曲霉DNA 用烟曲霉分泌蛋白检测侵袭性曲霉病人以及疾病模型动物抗体，评估诊断价值。 展望 血清学方法有益于IC的早期诊断； 目前市场提供诊断试剂品种少，检测的敏感性、特异性尚不能满足需要； 解决IC早期快速诊断问题任重而道远，需要同仁们共同努力！ 谢 谢！ 毛霉属（Mucor）、根霉属（Rhizopus）、犁头霉属（Absidia）、根毛霉属（Mucor Rhizomucor）、被孢霉属（Mortierella）、共头霉属（Sycephalastrum）、小克银汉霉属（Cunninghamella）、瓶霉属（Saksenaea）等致病的种多。 吸入孢子、创伤感染、食入污染食物致病。特点是菌丝侵犯血管，引起栓塞、组织坏死、化脓性反应和肉芽肿。 最常播散至脑，鼻窦炎、眶窝织炎、肺炎。 鼻脑毛霉病占30%~50%，病死率80%~90%，次为肺、胃、肠毛霉病。 毛霉目中有7个科、12属、24种致病 直接镜检标本中见90°角分支的宽大、透明、无分隔或极少分隔菌丝可诊断。确诊须从组织切片中找到菌丝。 虫霉目中1科、2属、3种致病： 蛙粪霉属(Basidiobolus)中的固孢蛙粪霉(B.haptasporus)，耳霉属(Conidiobolus)中的冠状耳霉(C.coronatus)和异孢耳霉(C.incongruus)。 传入途径: 微小外伤，昆虫叮咬。 直接镜检标本中宽大、不规则，无分隔的薄壁真菌菌丝及其片段。 分子生物学诊断：同念珠菌属。 25℃菌丝相、37℃酵母相的致病真菌包括申克孢子丝菌，马尔尼菲青霉、荚膜组织胞浆菌、粗球孢子菌、巴西副球孢子菌、皮炎芽生菌等。 有的有地域分布特点； 对人致病力强，感染无须免疫受损。 常见IFI病原（6）双相型真菌 自然界土壤、竹笋、甘蔗中（25℃）多以菌丝形式存在，组织中形成酵母样细胞，两端钝圆，有横隔。竹鼠为带菌动物。 吸入本菌孢子或食入霉变甘蔗发病。侵犯单核吞噬细胞系统，全身重要脏器均可受累。所致IFI 70%见于AIDS患者。 马尔尼菲青霉（Penicillium marneffei） 骨髓、外周血涂片，皮肤、淋巴结活检组织涂（切）片，溃疡分泌物涂片，巨噬细胞内外直径2~3μm，有1~3个横隔的椭圆（腊肠）形细胞。糖原染色可与黑热病LD小体和荚膜组织胞浆菌鉴别。 培养阳性为诊断金标准。阳性率骨髓100%，皮损90%，血液76%。血清学试验检测Mp1基因编码的本菌特异的胞壁甘露糖蛋白Mp1P抗原或其特异抗体。 分子生物学诊断：同念珠菌飞行属。 某些种与大骨节病、克山病、食管癌有关，在真菌性角膜炎中占58.7%。可致心、脑、肺感染和真菌血症。 引起的IFI逐年增多，发病率、死亡率仅次于白念珠菌和曲霉所致感染。 吸入本菌致肺感染，类似IA。侵犯血管引起血栓致组织坏死。 常见IFI病原（7）镰刀菌属（Fusarium） 特征： 典型镰刀形大分生孢子，大、小不等，有2～5个分隔。但即使多次